大鼠臍動脈平滑肌原代細胞

大鼠臍動脈平滑肌細胞分離自臍帶組織；它是臍動脈的重要結構組成細胞之一，在機體的正常生理過程中發揮著重要作用。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結構，臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2，代謝產物即代謝廢物和營養物質的交換。臍動脈將胎兒產生的廢物運送至胎盤，臍靜脈將O2和營養物質從胎盤運送給胎兒。由于臍帶是分娩過程中的廢棄物，同時從臍帶中分離臍靜動平滑肌細胞方法相對成熟，使得體外培養的臍動脈平滑肌細胞作為研究血管的模型細胞。臍動脈平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。

產品名稱：大鼠臍動脈平滑肌細胞

組織來源：臍帶

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠臍動脈平滑肌細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的優良培養狀態。

方法簡介

實驗室分離的大鼠臍動脈平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠臍動脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

人載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 試劑盒

Human tumor specific aigen (TSA) ELISA Kit 人腫瘤特異性抗原(TSA)試劑盒

HumanADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISAKit 人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humaninsulinaoaibodies,IAA試劑盒人胰島素自身抗體(IAA)試劑盒規格：96T/48T

組織基質金屬蛋白酶(MMP-9)琥珀酰明膠法比色定量試劑盒20次

HumanLegionellaaibodyIgM，LPAb-IgMELISAKit人軍團菌抗體IgM(LPAb-IgM)試劑盒規格：96T/48T

豚鼠白介素1β(IL1B)試劑盒 ，英文名： IL1B ELISA Kit

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素結合酶(E2/UBCE)試劑盒

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit 兔子白介素6(IL-6)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人絨毛膜β

細菌乙醇脫氫酶總活性(NDMA)比色法定量試劑盒20次

rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)試劑盒規格：96T/48T

人脂多糖結合蛋白(LBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人過氧化酶(GSH-Px)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人(GSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人17-類固醇(17-KS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

KLK13重組人 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白 Protein

胎盤堿性0酸酶(ALPP)重組蛋白 Recombinant Alkaline Phosphatase, Placental (ALPP)

SEMA3A重組人 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HIST1H3A Protein Human 重組人 Histone H3.1 / HIST1H3A / H3FA 蛋白

HA Protein H11N2 重組甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CLEC5A Others Cynomolgus 食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人細胞裂解液   MDA-MB-468(人癌細胞)     CM-H030人外周血白細胞胰島β細胞Many   CCL3 Protein Rat 小鼠原代視網膜微血管內皮細胞 兔原代滑膜間充質干細胞

大鼠臍動脈平滑肌原代細胞Gastrin(human 0.5mgGastrin(human)peptide(1-17) 胃泌素/蛙皮素(多肽人源)

IZUMO4 Protein Human 重組人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 標簽)

PVRL1重組大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ACE2 Protein Mouse 重組小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 標簽)

F7重組人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。