小鼠淋巴管內皮原代細胞

小鼠淋巴管內皮細胞分離自淋巴管組織；淋巴管由毛細淋巴管匯合而成。其形態結構與靜脈相似，但管徑較細，管壁較薄，瓣膜較多且發達，外形呈串珠狀。淋巴管根據其位置分為淺、深二種。它們管位于皮下，常與淺靜脈伴行，收集皮膚和皮下組織的淋巴。深淋巴管與深部血管伴行，收集肌肉和內臟的淋巴。淺、深淋巴管之間有廣泛的交通支。淋巴管在向心行程中，通常經過一個或多個淋巴結，從而把淋巴細胞帶入淋巴液。主要功能是濾過淋巴液，產生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應。當局部感染時，細菌、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結腫大。如該淋巴結不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉移。淋巴管內皮細胞（LEC）是襯覆于淋巴管內表面的一種單層扁平上皮，是構成淋巴管壁的主要結構，參與維持體液平衡，調節淋巴細胞再循環和機體的免疫反應和組織液及蛋白質的運輸，在疾病過程中也起著重要作用。近年研究表明，LEC還在傷口愈合、淋巴管水腫和炎癥擴散等病理過程中起重要作用，而且與腫瘤轉移密切相關。淋巴管內皮細胞主要功能：①調節體液、蛋白和組織壓力平衡；②為免疫系統的重要組成部分。淋巴管內皮細胞與主要病生理變化：①囊腫型淋巴管瘤；②淋巴管炎；③淋巴結核。

產品名稱：小鼠淋巴管內皮細胞

組織來源：淋巴管

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的小鼠淋巴管內皮采用蛋白酶消化法結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠淋巴管內皮經VEGFR3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。