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蛋白定量的方法有很多種，應用較多的主要有兩種：

BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發的。兩種方法均需配制蛋白標準品，蛋白與定量試劑經過一定時間的反應（BCA法反應為37℃、20-30min，Bradford法反應一般為37℃，5min），酶標儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標準曲線，依據標準曲線計算WB蛋白的濃度。兩種檢測方法相比BCA法，Bradford法不僅節省反應時間，也無需配置反應試劑，簡單、快速、好用，推薦Bradford法測定蛋白濃度。

嚴格來說，每次的蛋白濃度測定均需配制新鮮蛋白標準品，保證每次測到的蛋白濃度的準確性。然而，WB法評估蛋白表達水平本身就是一種半定量或者相對定量，因此在實際蛋白樣本準本及濃度測定時只需保證均一性即可，即使用同樣的標準曲線計算同一批蛋白的濃度，如果計算準備即可保證蛋白上樣時內參水平基本一致。因此，在實際操作中我們只需測定一次標準品的OD值、繪制標準曲線，即可用此曲線來計算后續實驗蛋白的濃度，節省時間和試劑。