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BCA蛋白濃度測定試劑盒實驗測定方法
閱讀：522 發布時間：2024-12-3 BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩定可靠的蛋白定量測定方法，其測定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更優的專用于檢測總蛋白質含量的產品。BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。其在562nm 處有最大的吸收值，通過與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。
原理: BCA(bicinchonininc acid)與二價銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一起顯示為蘋果綠色，即BCA 工作試劑。在堿性條件下，BCA 與蛋白質結合時，蛋白質將Cu2+還原為Cu+，一個Cu+螯合二個BCA 分子，工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復合物，最大光吸收強度與蛋白質濃度成正比。
測定方法：（96孔板）
1、配制BCA 工作液: 根據標準品和樣品數量，按50 體積試劑A，1 體積試劑B 配制適量BCA 工作液，充分混勻。
2、將蛋白標準品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標準品孔中，加滅菌雙蒸水補足到10 微升；取10 微升待測樣品加入96 孔板。每個測定要做2-3 個平行.
3、向帶測樣品孔和蛋白標準品孔中加入200 微升BCA工作液（即樣品與工作液的體積比為1：20）混勻。
4、37℃溫浴30min。冷取至室溫。
5、酶標儀562nm 波長下測定吸光度。
6、制作標準曲線，從標準曲線中求出樣品濃度。
注意事項：
1、反應顏色的深淺除了與樣品的蛋白質濃度相關外，還與反應的溫度有關。如果樣品
的濃度較高（>50μg/ml），反應溫度一般采用37 度。如果樣品蛋白質的濃度較低
（<50μg），反應的溫度為60℃，該溫度下，色氨酸、酪氨酸和肽鍵得到充分氧化，大
大提高檢測靈敏度。
2、該方法檢測的蛋白質濃度范圍20μg-500μg/ml；當蛋白濃度＜20ug/ml 時，推薦60℃
溫浴，并將蛋白液：工作液的比例調至1：8 進行測定（增強法）可以檢測到5ug/ml。
試劑A 和B 在室溫的穩定期至少1 年以上。標準蛋白液保存在－20℃,短期則4℃保存.