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Percoll細胞離心法

2021-9-16 閱讀(478)

 

1.先制備Percoll儲存液:Percoll原液(100%):0.9%NaCl的體積比為9:1。

2.取一50mlPolyethylene pipe,無菌采集人外周靜脈血,加4.4ml3.8%或5%的檸檬酸鹽液定容至40ml。上述全血300gX20min,離心,室溫。

3.吸出富含血小板的上清,2500gX15min,制備無血小板血漿(platelet-poor Plasma, PPP)。

4.余下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000,用無菌生理鹽水配制),并用生理鹽水(0.9%)調節最終體積至50ml,輕輕、*混勻。室溫沉降30min。

5.吸出富含白細胞的上層液,275gX6min。

6.沉淀的細胞用2~3mlPPP重懸。

7.在一15ml離心管中依次加入2ml42%、2ml51%Percoll(均為用PPP新鮮配制)、2~3ml細胞懸液,275gX10min。

8.單個核細胞及部分血小板位于血漿與42%Percoll液之間,中性粒細胞位于42%Percoll與51%Percoll之間。血小板可通過25%Percoll離心5min去除,也可在原密度梯度中加入第三個25%Percoll一起離心去除。

9.中性粒細胞層用PPP液冼1次,再用含糖的Krebs-Ringer磷酸緩沖液(KRPD,PH7.23)洗1次。

10.用這種方法可得80%中性粒細胞,純度在95%以上。

 



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