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上海吉至生化科技有限公司

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枯草芽孢桿菌的實驗

2023-7-21 閱讀(721)

實驗材料:

枯草芽孢桿菌, 種子培養基,發酵培養基,恒溫搖床,無菌吸管,試管,三角瓶,發酵罐。 

實驗方法: 

工藝流程:

試管斜面菌種(12 h,37℃)→接種(1環菌苔)→搖瓶種子培養液中,250 mL三角瓶振蕩培養(12 h,37℃)→種子培養液,接種(1%-5%)→機械攪拌發酵罐發酵。

發酵罐種子液的制備:

搖瓶種子培養基:葡萄糖 20 g,牛肉膏1 g,蛋白胨5 g, NaCl 5 g,HO 1 000 ml,pH自然 ,高壓滅菌鍋121℃滅菌20 min。

搖瓶種子培養基分裝于250ml三角瓶,每瓶50ml。從斜面上挑取一環菌種,接入搖瓶種子培養基,37℃,150rpm振蕩培養12小時即為種子液。

發酵培養基制備:

發酵培養基:蔗糖20 g,淀粉20 g,酵母膏1 g,蛋白胨5 g, NaNO3 3 g,KH2PO4 5 g, CaCO3 10 g,H2O 1 000 ml;pH7.0。

淀粉糊化:淀粉:水=1:4加入預熱至60℃水中,邊加邊攪拌,煮沸10分鐘成糊狀(煮沸過程中不斷攪拌)。 

發酵:

①空消:空罐滅菌。

②實消:將發酵培養基5L從進樣口倒入15 L發酵罐中,蓋上蓋子。檢查發酵罐安裝完好后, 105℃滅菌15分鐘。

③接種:可以采用火焰接種法,在接種口放置酒精圈,點燃后,將菌種通過火焰圈迅速倒入發酵罐內,進行計時培養。 

④發酵:種子培養好后,將種子接到發酵罐中,接種量1-5%,36°C—37°C 控溫通風培養,攪拌轉速200轉/分,0~1 h,通風比l:0.5~0.8;35 hr以后調速380轉/分;24~28小時,通風1:1.0。每6小時測定活力一次,外觀糖一次;每2小時測pH一次,記錄通風量,轉速、溫度等。發酵過程監測時,注意觀察發酵罐的結構,測定結果記錄于表,測定時同時鏡檢。定期測定菌濃,當菌濃達到最高時結束發酵。

⑤取樣:自培養操作開始起,每6h取1次樣。取樣前后,要用蒸汽沖取樣口。




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