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基因編輯關鍵步驟單克隆篩選,如何提速?

閱讀:251        發布時間:2024-5-27


鐮狀細胞病(sickle cell disease,SCD)是一組由血紅蛋白β亞單位基因(HBB)的異常變異引起的單基因遺傳性血液疾病,異常的血細胞在血管中黏附堵塞,導致血液流動受阻,引起一系列血栓、貧血、器官受損等嚴重癥狀。據統計,全球每年約有300,000例患者正受此困擾。

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迄今為止,SCD治療選擇非常有限,干細胞移植被認為是治愈SCD的有望辦法,然而移植手術需要捐獻者匹配且存在排斥風險。近日,美國FDA批準了兩種針對鐮狀細胞病的新型基因療法,即Vertex和CRISPR聯合的Casgevy和藍鳥生物的Lyfgenia。Casgevy是獲批上市的CRISPR基因編輯的基因療法, 且1月16日FDA已批準用于治療依賴輸血型β地中海貧血(TDT)患者。 

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人血紅蛋白由2對珠蛋白組成。珠蛋白有四種,141個氨基酸殘基的α珠蛋白和含146個氨基酸殘基的非α珠蛋白(β、γ及δ型)。胎兒血紅蛋白(HbF)由一對α珠蛋白和一對γ珠蛋白組成(α2γ2),在出生后6個月內降至1%,此后變為HbA,由一對α珠蛋白和一對β珠蛋白組成(α2β2)。

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Casgevy利用CRISPR編輯技術對BCL11A基因敲除,使得造血干細胞中的γ珠蛋白表達上調,β珠蛋白的表達下降,從而產生胎兒血紅蛋白(HbF)。胎兒血紅蛋白是一種健康,可以正常攜帶氧氣的血紅蛋白。胎兒血紅蛋白水平升高可防止紅細胞鐮狀病變。

在使用CRISPR基因編輯技術操作后,通常會使用單細胞克隆來獲取含有特定基因編輯的細胞群體。這樣可以確保所有細胞都具有相同的基因改變,從而減少實驗中的變異性。單細胞分離儀Pala可實現基因編輯后的細胞分離并分選至孔板中,篩選出成功敲除目標基因的克隆。
















全自動柔性單細胞分離儀Pala

基因編輯篩選單克隆解決方案

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• 極低的流體壓力(<2psi),確保細胞的活性與功能

• 單細胞分離至96孔板耗時<1min, 分離至384孔板耗時<6min

• 熒光分選:405nm,488nm,561nm

• 適用樣本細胞濃度范圍廣100 cells/ml至1.5×108cells/ml

• 一次性使用的分離芯片,避免樣本間的交叉污染

• 操作簡單,無需專門維護,固定光路無需校準,開機即用

• 整機輕巧,可置于生物安全柜中






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