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SAECs（小氣道上皮細(xì)胞，Catalog: CC-2547）是藥物發(fā)現(xiàn)中靶點(diǎn)鑒定和驗(yàn)證的重要模型。在本應(yīng)用中簡(jiǎn)要總結(jié)了利用 RNPs、384 孔 Nucleofector™ 系統(tǒng)（Catalog: AAU-1001）和 P3 原代細(xì)胞 384 孔 Nucleofector™ 試劑盒（Catalog: V5SP-3002）對(duì) SAECs 進(jìn)行自動(dòng)陣列 CRISPR 篩選的工作流程。
隨著系統(tǒng)生物學(xué)與交叉學(xué)科方法的應(yīng)用，要求細(xì)胞和系統(tǒng)模型越來越接近體內(nèi)細(xì)胞的功能。這就意味著將來的細(xì)胞轉(zhuǎn)染多數(shù)會(huì)是原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。而傳統(tǒng)的方法很難成功轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞。另外即使使用細(xì)胞系做為系統(tǒng)模型，傳統(tǒng)的方法也難重復(fù)出好的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率與成活率。Nucleofector技術(shù)就從根本上解決這個(gè)問題,無論是原代細(xì)胞、干細(xì)胞、還是細(xì)胞系,它每次都可重復(fù)出很高的轉(zhuǎn)染效率。1998年，Nucleofectorm技術(shù)開發(fā)成功，2001年上市，是龍沙在市場(chǎng)上第一個(gè)有效的、非病毒介導(dǎo)的、用于原代細(xì)胞與難轉(zhuǎn)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染方法。現(xiàn)在Lonza還在繼續(xù)不斷改革創(chuàng)新,為研究者推出更多更好的新產(chǎn)品。
原理
Nucleofector™/技術(shù)是一種基于通過施加電脈沖在細(xì)胞膜中瞬間產(chǎn)生小孔,綜合各種Nucleofector™程序和細(xì)胞類型特異性電轉(zhuǎn)試劑,使核酸底物不僅可以輸送到細(xì)胞質(zhì),還可以通過核膜進(jìn)入細(xì)胞核。這使得細(xì)胞最高轉(zhuǎn)染效率可達(dá)99%,并使轉(zhuǎn)染成功不依賴于細(xì)胞的增殖分裂。
