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突破細胞轉染障礙:電穿孔技術非病毒基因轉染與六大應用分享

2024-6-18  閱讀(249)

分享:

傳統的轉染技術無法有效轉染許多常用于細胞療法的細胞類型,如原代T細胞。而電穿孔是一種強大的轉染工具,它利用電脈沖瞬時增加細胞膜的通透性,使裸物質(如DNA/RNA、蛋白質等)短時大量進入細胞完成載體遞送,以更低成本、更靈活高效和更安全可持續的優勢,成為非病毒載體轉染中前景的新興技術之一。

然而你真的了解電穿孔技術嗎



RegMedNet所推出的電穿孔工具書中邀請到了Arsenal Biosciences聯合創始人Theodore RothLonza細胞工程研發主管Ludger Altrogge,重點回答了六道精華問題。




Theodore Roth

Arsenal Biosciences

聯合創始人



Ludger Altrogge

Lonza細胞工程研發主管


Interview

超越障礙:

關于非病毒轉染的訪談

Q1

Ludger, 電穿孔等非病毒方法在基因修飾方面的優勢在哪里?

非病毒方法在使用的貨物/底物類型方面具有靈活性。例如,它不能只傳遞核酸(DNA、mRNA),也不能傳遞蛋白質,如用于CRISPR基因編輯的Cas9 RNPs。非病毒方法既適用于治療基因的瞬時表達,也適用于細胞的穩定遺傳工程。前者可以通過通過傳遞mRNA或DNA(質粒、而轉座酶系統(如睡美人或 PiggyBac)以及用于定向整合的工程化核酸酶(如CRISPR)可實現穩定的細胞基因工程。基于病毒和轉座酶的改造通常更有效,但由于整合在基因組中隨機發生,因此可控性較差。將工程化的核酸酶作為重組的RNPs運送,可以更好地控制修飾的劑量。

Q2

Theo,你是如何在實驗室中使用電穿孔技術的?

Q3

Ludger,你能詳細介紹一下龍沙提供的非病毒基因轉移技術嗎?

Q4

Theo,在你看來,使用Nucleofector™技術進行CRISPR/Cas9介導的基因組編輯有哪些優勢?

Q5

Theo,你們也進行 CRISPR 篩選嗎?

Q6

Theo,您認為核轉染技術在治療方法和藥物開發中的應用前景如何?

除此之外,更有以下內容免費分享給大家。

Review:對間充質干細胞進行改造以增強骨靶向性和骨再生能力



Poster:誘導性Cas9 T細胞:異體CAR-T細胞生成的創新平臺



Research article:用于體內應用的人CD34+祖細胞的高效瞬時基因標記

Poster:原代人類肝細胞的高效轉染和長期持續功能性



Review:CRISPR介導的DNA甲基化模式修飾在癌癥治療新時代的應用

Benchmark:通過流式細胞術和桑格測序評估CRISPR/Cas9介導的CD19基因敲除GM24385細胞的方案


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