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2x 長片段PCR 擴(kuò)增預(yù)混液（ long fragment PCR Master Mix）說明書

時(shí)間：2023/8/23閱讀：609

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使用方法

充分溶解并混勻PCR反應(yīng)所需的各種溶液。將2x 長片段PCR 擴(kuò)增預(yù)混液（ long fragment PCR Master Mix）置于冰浴上或冰盒內(nèi)。參考下表在冰上設(shè)置PCR反應(yīng)：

Component	20uL RXN	25uL RXN	50uL RXN	Final Concentration
2x 長片段PCR 擴(kuò)增預(yù)混液	10uL	12.5uL	25uL	1 ×
10uM Forward Primer	0.4uL	0.5uL	1.0uL	0.2uM
10uM Reverse Primer	0.4uL	0.5uL	1.0uL	0.2uM
Template DNA	variable	variable	variable	variable
Nuclease-Free Water	to 20uL	to 25uL	to 50uL

2 . 不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同，反應(yīng)體系推薦模板使用量可參見下表。

Template DNA	20uLRXN	25uL RXN	50uL RXN
Genomic DNA	4ng-0.4ug	5ng-0.5ug	10ng-1ug
Plasmid or Vrial	4pg-4ng	5pg-5ng	10pg-10ng
cDNA	4pg-0.4ug	5pg-0.5ug	10pg-1ug

3. 用移液器輕輕吹打混勻或輕微Vortex混勻，室溫離心數(shù)秒，使液體積聚于管底。

反應(yīng)程序

1 .退火溫度應(yīng)根據(jù)引物Tm值進(jìn)行調(diào)整(50-72℃)。

2. 延伸時(shí)間需根據(jù)擴(kuò)增片段的長度和復(fù)雜性進(jìn)行調(diào)整。

3. 各設(shè)置好的PCR反應(yīng)管置于PCR儀上，開始PCR反應(yīng)。

STEP	TEMP	TIME
Initial Denaturation	98°C	30 sec
25–35 Cycles	98°C	10 sec
	50–72 °C	15 sec
	72°C	15-30 sec/kb
Final Extension	72°C	5 min
Hold	4–10 °C	∞

運(yùn)輸及保存方法

-20℃ 保存一年干冰運(yùn)輸

貨號	品名	規(guī)格	品牌
78DC10152-1ml	2x 長片段PCR 擴(kuò)增預(yù)混液（long fragment PCR Master Mix）	1ml	BIOHUB
78DC10152-5ml	2x 長片段PCR 擴(kuò)增預(yù)混液（long fragment PCR Master Mix）	5ml	BIOHUB
78DC10152-3*5ml	2x 長片段PCR 擴(kuò)增預(yù)混液（long fragment PCR Master Mix）	3*5ml	BIOHUB

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