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大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

時間：2023/10/18閱讀：615

大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

產品描述

本品為大腸桿菌HMS174 (DE3)（基因型：K-12,F-,λDE3[lacI,lacUV5-T7gene1,ind1,sam7,nin5],recA1,hsdR19,IN(rrnD-rrnE)1,rph-1,rpoB331(rifR)）制作的高效感受態，該菌株源于大腸桿菌K12菌株，含有RecA突變。對于能夠導致DE3噬菌體損失的特定基因，該菌株能夠穩定表達這種基因。DE3是溶源性的λDE3，帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝，可在IPTG誘導下表達T7 RNA聚合酶。HMS174 (DE3)具有完整的乳糖代謝途徑，故在誘導蛋白表達時，可以用乳糖同時作為唯yi碳源和誘導劑，因此不需要IPTG作為誘導劑，成本比BL21(DE3)以葡萄糖做碳源，以ITPG做誘導劑的表達模式低，適合工業級大規模表達外源蛋白。該菌株同時具有利福平抗性。HMS174 (DE3)是染色體上攜帶lacUV-T7 RNA聚合酶基因的專門用于蛋白表達的K-12菌株。該菌株適用于pET系列載體，及其他T7啟動子系列載體，與BLR(DE3)類似。經pUC19 質粒（2686bp，AmpR）檢測轉化效率>1×107 cfu/μg DNA。

注意事項

1. 感受態細胞解凍后應立即使用，不可在冰中放置過長時間。

2. 不能用移液器抽吸感受態細胞，用手指輕彈混勻即可。

3. 質粒使用量<50 ng即可獲得很好的轉化。

使用方法

1. 從-80 ℃冰箱中取出感受態細胞，放入冰中5 min，加入目的質粒或連接產物，輕彈使混合均勻，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴鍋中熱激90 s，立即插入冰中靜置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液體培養基，37℃搖床220 rpm培養60 min；

4. 離心（質粒轉化無需離心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均勻涂布抗性平板，37℃培養箱放置過夜。

貨號	品名	規格	品牌
78BDC10020-10×100uL	HMS174 (DE3)	10×100uL	BIOHUB
78BDC10020-50×100uL	HMS174 (DE3)	50×100uL	BIOHUB

大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

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