分子量：約 240,000 道爾頓

組成：蛋白的亞基組成為(alpha-beta)6gamma。每個alpha-亞基和 beta-亞基約 20,000 道爾頓，每個

gamma 亞基約 30,000 道爾頓。

純度： Amax/A280 > 5.5

激發(fā)波長： ：450-500 nm

發(fā)射 波長： ：575 ± 5 nm

形態(tài)：硫酸銨沉淀

1、該產(chǎn)品為硫酸銨沉淀，將其置換至20mM 磷酸鹽緩沖液中使用。

2、在較寬的 pH 范圍內(nèi)具有較寬的吸收光譜，比較容易選擇合適的激發(fā)波長，從而得到高效熒光發(fā)射，

且激發(fā)時有特異的熒光發(fā)射峰；

3、吸光度和熒光量子產(chǎn)率很高，熒光強而穩(wěn)定，靈敏度高；

4、具有較小的熒光背景，不易淬滅，熒光保存期較長；

5、易與其他分子交聯(lián)結(jié)合，非特異性吸附少；

6、chun天然海洋生物提取，無任何毒副作用，不含放射性，操作使用非常安全。易與抗體、生物su、

親合素、 免疫蛋白等物質(zhì)結(jié)合，制成熒光探針。

藻紅蛋白：分子量約 240000 道爾頓；PD-10 柱(葡聚糖凝膠層析柱 Sephadex G-25M) ，安瑪西亞 Amersham公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號 No. 17-0851-01； NAP5 柱(葡聚糖凝膠層析柱 Sephadex G-25 DNA grade)， 安瑪西亞Amersham 公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號 No 17-0853-02；琥珀酰亞胺-4-(N- 甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)，Pierce 公司，產(chǎn)品目錄號 No.22360；N-乙基馬來酰胺（NEM），Sigma 公司，產(chǎn)品目錄號 E-1271；二甲基亞砜（DMSO），Aldrich 公司，產(chǎn)品目錄號 No. 27,685-5。

將藻紅蛋白沉淀復(fù)溶為溶液，用脫鹽柱或超濾管除鹽并將其緩沖液置換為20mM 磷酸鹽緩沖液，調(diào)整藻紅蛋白的最終濃度為5-10毫克/毫升。

將琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)溶解于無水二甲基亞砜（DMSO）配制成 10毫克/毫升的母液，每毫克的藻紅蛋白添加 11 微升的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)

(SMCC)，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘，使藻紅蛋白分子上的氨基與琥珀酰胺反應(yīng)生成衍生化的藻紅蛋白。交換緩沖液預(yù)先平衡凝膠層析柱，將衍生化的藻紅蛋白過柱，收集藻紅蛋白峰。

二硫蘇糖醇（DTT）溶解于蒸餾水中，配制成 1 摩爾/升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，調(diào)整抗體的濃度，使其濃度至少為 4 毫克/毫升。

每毫升抗體溶液中加入 20 微升的二硫蘇糖醇（DTT）母液，室溫靜置反應(yīng) 40 分鐘，將抗體的二硫鍵打開形成巰基。交換緩沖液預(yù)先平衡凝膠柱，將反應(yīng)液過柱，收集抗體部分。

每毫克抗體加入 3.2 毫克的琥珀酰亞胺-4-(N-甲基馬來酰亞胺)環(huán)已烷-1-碳酸酯)(SMCC)衍生化的藻紅蛋白，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘，使藻紅蛋白分子上的馬來酰亞胺基和抗體上的巰基實現(xiàn)共價交聯(lián)。

10 毫克的 N-乙基馬來酰胺（NEM）溶解于 1.0 毫升的無水二甲基亞砜（DMSO）中制成 N-乙基馬來酰胺（NEM）母液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。每毫克抗體中加入 3.4 微升N-乙基馬來酰胺（NEM）母液，鋁箔封好后于室溫旋轉(zhuǎn)反應(yīng) 60 分鐘， 反應(yīng)后，使抗體上的巰基封閉。