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制備兩種儲備液，分別是生物柴油濃度為 20% (v/v) 和 4% (v/v) 的標準美國汽 車柴油。將這些溶液進行稀釋，得到生物柴油濃度為 0.8、1.2、3、4、6、8 和 10% (v/v) 的柴油溶液。

使用配有光程為 100 µm 的 Tumbler 透射池的 Agilent 5500t FTIR 光譜儀對含有 上述濃度生物柴油的每個柴油樣品進行測量：4 cm-1 分辨率下通過 32 次掃描進行 數據采集，樣品測量時間為 15 秒。所有樣品均重復測定三次。根據 EN14078 方 法“液化石油制品 — 測定中間餾分中的脂肪酸甲酯 (FAME) 的含量 — 紅外光譜 法”繪制校準曲線。以 1745 cm-1 處的大吸收度對生物柴油體積百分比作圖。