您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
7
購買到原代細胞之后應(yīng)該注意什么事項
原代細胞是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。對原代細胞最直觀的理解，就是不能無限傳代下去，不論你是自己提取的細胞還是從試劑公司購買的細胞，都會建議你在P2-P3代完成實驗是*。所以，掌握提取和培養(yǎng)原代細胞的技巧，盡可能地讓細胞的好狀態(tài)多維持幾代，對實驗成敗來說至關(guān)重要。那么對已經(jīng)購買的細胞之后應(yīng)該注意什么注意事項呢
1. 收到細胞時，要鏡下觀察是否有污染情況；收到細胞的前幾天，要做好各種倍數(shù)的鏡下拍照記錄，以防細胞出現(xiàn)問題后，可以跟公司很好地溝通。
2. 收到細胞后，不要馬上處理。應(yīng)置于培養(yǎng)箱中靜置4h以上再操作。如果不著急，可靜置過夜。
3. 細胞的第一次傳代，一定要密度高一些傳代，原代細胞傳代密度低，很難長起來。建議1:2-1:3傳代。
4. 原代細胞傳代時(內(nèi)皮細胞，貼壁為例)，0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培養(yǎng)箱內(nèi)消化30sec，再加入5ml培養(yǎng)基(正常消化貼壁細胞，我們使用胰酶和培養(yǎng)基的量是1:1，但是原代細胞必須用大量培養(yǎng)基中和胰酶)。
5. 原代細胞不建議凍存，因為凍存很容易復(fù)活不成功。如果要凍存的話，建議在P2或P3代凍存，凍存液中的血清越多越好，建議比例9(血清):1(DMSO)。
6. 原代細胞復(fù)蘇時，置于37-38度水浴融化細胞，并加入10ml培養(yǎng)液(正常貼壁細胞復(fù)蘇時，也可以使用這種比例，復(fù)蘇成活率會大大提高)，離心重懸鋪板。