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本生闡述:操作步驟三組織切片染色

時間:2023/2/2閱讀:1528
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  本生闡述:操作步驟三組織切片染色

  1、Giemsa工作液的配制: 按試劑(A): 試劑(B) =1:9配制Giemsa stain工作液,即取1份的Giemsa stain儲存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中,充分混勻,即為Giemsa stain工作液。配制后的Giemsa stain工作液為即用型試劑,不易保存,即用即配。

  2、新鮮組織立即置于Regaud固定液固定2天,期間應更換1次固定液。

  3、3%的重鉻酸鉀固定1天。

  4、流水沖洗16個小時或過夜。

  5、按照常規脫水、包埋。

  6、切片,厚度約為5μm。

  7、常規脫蠟至水。

  8、蒸餾水清洗2次,每次約1min。

  9、置于含有Giemsa stain工作液的染缸內,浸染18~24h。

  10、蒸餾水稍微清洗。

  11、0.1~0.5%的乙酸洗1~2min。

  12、自來水稍沖洗。

  13、用無水乙醇迅速脫水3次,每次5~10s。

  14、二甲苯透明。

  15、中性樹脂封固。

  染色結果:

  細胞核藍色至紫色

  細胞質淡藍色

  嗜鉻細胞胞質黃綠色

  結締組織淡紅色

  注意事項:

  1、 血液涂片或骨髓涂片應厚薄均勻,以免影響染色結果。

  2、 涂片染色中Giemsa染色后,請勿先去除染液或直接對涂片用力沖洗。

  3、 如果染色過深或過淺,應調整染色時間或工作液的濃度。

  4、 Giemsa涂片染色和組織切片染色中,pH值對染色有一定影響,載玻片應清潔無酸 堿污染以免影響染色結果。

  5、染色液在稀釋后液面應有金屬光澤,表示染液有染色作用,否則染色液可能失效。 6、 Giemsa組織切片染色中,染色后需用大量0.1~0.5%的乙酸急速沖洗,避免浮面 沉淀 物污染切片后難以洗脫。

  7、0.1~0.5%的冰乙酸分化,常用于Giemsa組織切片染色,如有必要亦可用于細胞涂片,但其濃度應適量下調。0.5%的冰乙酸分化切片時,切片呈粉紅色即可終止。

  8、Giemsa組織切片染色中,無水乙醇脫水要迅速,否則切片易褪色。

  9、Giemsa涂片染色和組織切片染色中,如需急速獲得結果,可以按Giemsa stain儲存液:磷酸鹽緩沖液(1×) =1:1配制,即取吉姆薩儲存液(10×)1份、磷酸鹽緩沖液(1×)1份,充分混勻,即為快速吉姆薩染色工作液,將染色液滴加于細胞涂片或組織切片上,加熱染色,20~30s后重新加染色液,反復5~10次,其余步驟同上。

  10、染色液可重復使用,但不能多次重復,若有沉淀物應過濾后使用。

  11、Regaud固定液:按3%重鉻酸鉀水溶液:甲醛=4:1配制,臨用前混勻,1~2天后失效。

  12、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 13、使用場所應通風,并遠離火源。

  有效期: 24個月有效甲基綠。

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