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ELISA實驗:ELISA樣本收集處理方法

時間:2025/7/14閱讀:193
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  ELISA實驗:ELISA樣本收集處理方法

  以下是ELISA實驗中不同樣本類型的收集與處理方法,結合實驗規范與關鍵注意事項進行系統整理:

  一、血清樣本處理

  采集要求?

  使用無熱源、無內毒素的試管采集血液,室溫靜置2小時或4℃過夜使血清析出,傾斜放置可增加析出效率?。

  4℃條件下1000×g離心20分鐘,避免溶血(紅細胞裂解會釋放過氧化物酶干擾HRP標記檢測)?。

  保存方法?

  分裝后-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。溶血或高血脂樣本需棄用?。

  二、血漿樣本處理

  抗凝劑選擇?

  采用EDTA或肝素鈉抗凝管采集血液,30分鐘內4℃ 1000×g離心15分鐘取上清?。

  需核對試劑說明書,部分檢測對抗凝劑類型有特殊要求(如避免肝素干擾某些抗體結合)?。


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  存儲注意事項?

  分裝冷凍保存,避免室溫長時間放置導致凝血因子降解?。

  三、細胞培養上清處理

  預處理步驟?

  收集上清后需兩次離心:1000×g離心20分鐘去除細胞碎片,第二次13000×g離心10分鐘確保雜質清除?。

  酸化中和處理:100μL樣本加20μL 1N HCl孵育10分鐘,再用20μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES中和?。

  質量控制?

  建議BCA法測定總蛋白濃度,確保樣本一致性?。

  四、組織樣本處理

  勻漿制備?

  冰上操作:按10mg組織加入100-200μL裂解液,勻漿后4℃靜置20分鐘?。

  離心條件:13000×g離心10分鐘取上清,重復離心可提高純度?。

  緩沖液選擇?

  推薦0.05mol/L Tris或磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)維持等滲環境?。

  五、通用注意事項

  防污染措施?

  使用一次性耗材,加樣時更換槍頭,避免交叉污染?。

  操作分區:加樣、孵育、洗滌區域分離,高濃度樣本最后處理?。

  穩定性控制?

  凍存樣本需緩慢解凍(2-8℃ 30分鐘以上),避免直接室溫解凍導致蛋白變性?。

  通過規范化的樣本處理流程,可顯著提升ELISA檢測的準確性和重復性?。

  注:以上資料僅供參考,具體產品請咨詢技術老師或是品牌供應商。

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