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茁彩生物｜HE染色（蘇木精 - 伊紅染色法）
閱讀：2089 發(fā)布時(shí)間：2023-4-24蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用廣泛的技術(shù)方法。
原理：
去氧核糖核酸（DNA）兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中稱(chēng)藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在Chemicalbook水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合使胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。
樣本：
石蠟切片、冰凍切片
操作步驟：
石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無(wú)水乙醇Ⅰ10min-無(wú)水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。
蘇木素染細(xì)胞核：切片入Harris蘇木素染3-8min，自來(lái)水洗，1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水沖洗，0.6%氨水返藍(lán)，流水沖洗。
伊紅染細(xì)胞質(zhì)：切片入伊紅染液中染色1-3min。
脫水封片：將切片依次放入95%酒精I(xiàn) 5min -95%酒精I(xiàn)I 5min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min -無(wú)水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來(lái)稍晾干，中性樹(shù)膠封片。
顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。染色結(jié)果：細(xì)胞核藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)紅色。
圖例展示：
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色，粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。
著色情況與組織或細(xì)胞的種類(lèi)有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí)，伊紅著色由淺變深。
H-E染色評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：
（1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均勻，無(wú)皺褶無(wú)刀痕；
（2）染色核漿分明，紅藍(lán)適度，透明潔凈，封裱美觀