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技術(shù)文章

細(xì)胞遷移研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹

閱讀:121          發(fā)布時(shí)間:2024-9-19
細(xì)胞遷移


應(yīng)用簡介
       遷移是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中bi不可少的環(huán)節(jié)之一。腫瘤細(xì)胞與母體瘤分離,穿越血管壁,侵襲周邊正常組織時(shí),需要一定的運(yùn)動能力。高轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞通常具奮較強(qiáng)的運(yùn)動性。多種物質(zhì)可剌激腫瘤細(xì)胞的遷移,如腫瘤細(xì)胞分泌因子、生長因子、細(xì)胞外基質(zhì)成分(FN、LN)以及一些癌轉(zhuǎn)移靶器官的代謝產(chǎn)物或分泌產(chǎn)物等生長因子對腫瘤細(xì)胞有趨化作用,可使其發(fā)生定向運(yùn)動。測定方法以細(xì)胞劃痕法和Transwell小室法。
技術(shù)原理
       細(xì)胞劃痕法是簡捷測定細(xì)胞遷移運(yùn)動與修復(fù)能力的方法,類似體外傷口愈合模型,在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上,用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細(xì)胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間,取出細(xì)胞培養(yǎng)板,觀察周邊細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū),以此判斷細(xì)胞的生長遷移能力,實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別,通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力,可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。
實(shí)驗(yàn)方法

技術(shù)總結(jié)
【注意事項(xiàng)】
       1、鋪細(xì)胞最好使用6孔板,因?yàn)?空板可以保證有相當(dāng)距離的平直劃痕,因?yàn)橛?條定位線,與劃痕相交,這樣就有10個(gè)可固定監(jiān)測點(diǎn),不作重復(fù),誤差也很小。
       2、如果連續(xù)監(jiān)測24小時(shí),需要考慮到劃痕縮小是細(xì)胞遷移和細(xì)胞繁殖共同作用的結(jié)果,而不是單純的細(xì)胞遷移。如果要單純的考慮細(xì)胞遷移,可以先用si裂霉素(1μg/ml)處理一小時(shí),抑制細(xì)胞的分裂,這樣結(jié)果就是細(xì)胞遷移的作用了。另外,使用無血清培養(yǎng)基也可以降低增殖對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
       3、照片拍完之后,可以用imageJ來測量劃痕區(qū)域的像素定量比較細(xì)胞遷移的速度。
       4、雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響,但是由于細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié),細(xì)胞遷移的速度也會慢很多。
【常見問題】
       細(xì)胞劃痕時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞沒有長滿,或是長的太滿?
       R鋪板時(shí)的數(shù)量須根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)、增殖速度、大小進(jìn)行調(diào)節(jié),細(xì)胞較小或增殖速度慢,鋪板數(shù)量需多于6×105個(gè)細(xì)胞/孔;細(xì)胞較大或增殖速度較快則需少于6×105個(gè)細(xì)胞/孔;
       細(xì)胞鋪板時(shí),前面鋪的孔細(xì)胞密度稀,后面鋪的孔細(xì)胞密度密?
       R細(xì)胞鋪板,細(xì)胞單細(xì)胞懸液混合后,鋪板過程中需要邊鋪板邊晃動管子,保證細(xì)胞在懸液中均勻分布;
       拍出來的照片背景顏色不一或亮度不一?
       R在拍照前進(jìn)行白平衡;固定曝光時(shí)間。作為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移研究中的重要角色,這個(gè)任重道遠(yuǎn)的過程需要很多bi不可少的步驟,準(zhǔn)確易行也是對實(shí)驗(yàn)的要求之一。


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