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產(chǎn)品簡介
克柔念珠菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Candida krusei |
貨號(hào) | CP934024 |
產(chǎn)品特征:
克柔念珠菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是克柔念珠菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
2-基-4-基-1,3-氧硫雜環(huán)己烷人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)ELISA Kit，48T/96T
2,2-二基噻唑烷人黑色素瘤相關(guān)抗原(MAGE)ELISA Kit，48T/96T
1--2-基烷人套膜蛋白(iNV)ELISA Kit，48T/96T
四基二烯基二硅氧烷人鳥氨酸脫羧酶(ODC)ELISA Kit，48T/96T
碘基三基硅烷人轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA Kit，48T/96T
N-(2-基)吡咯烷人纖維母細(xì)胞表面抗原(FSP)ELISA Kit，48T/96T
2--2-(二氟氧基)-1,1,1-三氟烷人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA Kit，48T/96T
(S)-(-)-1,2-環(huán)氧烷人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA Kit，48T/96T
全氟己烷人抗利尿激素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA Kit，48T/96T
2,2-雙(4-羥基-3,5-二基苯基)烷小鼠抗利尿激素/精氨酸加壓素(ADH/AVP)ELISA Kit，48T/96T
3-基-3-羧基-1-氧雜環(huán)烷人抗卵巢抗體(AOAb)ELISA Kit，48T/96T
2,4-二基己烷人抗透明帶抗體(aZP)ELISA Kit，48T/96T
二烷-D2人抗膠原蛋白抗體(CLA)ELISA Kit，48T/96T
(R)-(-)-芐氧基環(huán)氧烷人胸腺依賴性抗原(TD-Ag)ELISA Kit，48T/96T
克柔念珠菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2-硝基亞氨基咪唑烷人胸腺非依賴性抗原(TI-Ag)ELISA Kit，48T/96T Calbindin/Calbindin D28k 鈣結(jié)合蛋白D28K抗體果糖二酸鈉
CaIPLA2/PLA2G6 胞漿鈣獨(dú)立脂酶A2抗體鹽酸噻匹定
CAGE1/CT3/CT95 腫瘤/睪丸抗原3抗體鹽酸文拉法辛
CADM3/IGSF4B 細(xì)胞粘附分子3抗體呋塞米
CADM2/IGSF4D/Cell adhesion molecule 2 細(xì)胞粘附分子2苯磺酸左旋氨地平
CADM 4 細(xì)胞粘附分子4抗體高烏素
Cadherin like 23 鈣粘蛋白23抗體磺酸羅哌卡因
Cadherin 9 鈣粘附蛋白9抗體甘草酸二鉀
Cadherin 8 鈣粘附蛋白8抗體尼美舒利
Cadherin 8 鈣粘附蛋白8抗體奧扎格雷
Cadherin 10 鈣粘附分子10抗體鹽酸格拉司瓊
Cactin/C19orf29 19號(hào)染色體開放閱讀框29抗體鹽酸昂丹司瓊
CACNB2 L-型電壓依賴型鈣通道β抗體普羅布考
CACNB1 鈣通道電壓依賴性β1蛋白抗體芐達(dá)氨酸
CACNA1S 電壓依賴性鈣通道Cav1.1抗體鹽酸特比萘芬
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研