實驗室中所用的玻璃層析柱有兩種形式：一是下部帶有活塞的玻璃管，活塞的芯最好是聚四氟乙烯制作的，這樣可以不涂真空油脂，以免污染產品。如果使用普通的玻璃活塞，則真空油脂要小心地涂薄涂勻。另一種是將玻璃管下端拉細，套上一段彈性良好的管子。這段管子必須是不能被淋洗劑溶解的，普通橡皮管一般不可充作此用，因為橡皮易被氯仿、苯、THF等溶劑溶脹，而聚乙烯管子對大多數溶劑是惰性的，所以常常使用。用一只螺旋夾控制流速，此外，薄膜塑料柱因使用方便、節省淋洗劑、減少蒸發量等優點，應用日趨廣泛。薄膜塑料柱總是以扁平成卷保存的，兩側常有很深的折痕。使用前需將裁取的一段薄膜管一端扎緊，另一端套在一段玻璃管上并用棉線扎緊。將這段玻璃管穿過一個單孔塞。然后將薄膜管放進一根又粗又長，下端拉細了的玻璃管內，使塞子塞緊大玻璃管的口。用水泵自大玻璃管下端抽氣，薄膜柱即因內部壓強大于外部而自行展圓。待裝入吸附劑后在其下部扎幾個小孔即可使用。

玻璃層析柱的尺寸根據被分離物的量來確定，其直徑與高度之比則根據被分離混合物的分離難易而定，一般在1∶8到1∶50之間。柱身細長，分離效果好，但可分離的量小，且分離所需時間長;柱身短粗，分離效果較差，但一次可以分離較多的樣品，且所需時間短。如果待分離物各組分較難分離，宜選用細長的柱子，如果要處理大量的較易分離的或對分離純度要求較低的混合物，則可選用粗而短的柱子。最常使用的層析柱，直徑與長度之比在1∶8 到1∶15 之間。