XL1-Blue MRF` Kan:                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                       10μl

保存條件（保質(zhì)期）：                           -80℃（6個月）

基因型

?(mcrA)183 ?(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F´proAB lacIqZ?M15 Tn5 (Kan^R)]

產(chǎn)品說明

XL1-Blue MRF’Kan菌株來源于XL1-Blue株系，是限制酶系統(tǒng)缺失型[?(mcrA)183, ?(mcrCB-hsdSMR -mrr)173],，且具有卡那霉素抗性 (Kan^R)，可轉(zhuǎn)化具有氯霉素或四環(huán)素抗性的質(zhì)粒。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdR17突變導(dǎo)致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。 lacI^qZΔM15 的存在使XL1-Blue MRF’Kan菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。XL1-Blue MRF’Kan感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. XL1-Blue MRF’Kan感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA并用手打EP管底充分混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或

LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. XL1-Blue MRF’Kan感受態(tài)細(xì)胞具有卡那霉素抗性，不可轉(zhuǎn)化具有卡那霉素抗性的質(zhì)粒。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。