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MSU440感受態(電轉)

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  • 型號 EC96316
  • 品牌 其他品牌
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市

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更新時間:2024-10-31 09:32:10瀏覽次數:89

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產品簡介

發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠
感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。 MSU440 發根農桿菌菌株含有農桿
堿型 Ri 質粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,茶樹,青蒿等),同時具有鏈m素抗性。本公
司生產的 MSU440 電轉化感受態細胞經特殊工藝制作,pCAMBIA2301 質粒(卡那n素

詳細介紹

產品簡介
發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠
感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。 MSU440 發根農桿菌菌株含有農桿
堿型 Ri 質粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,茶樹,青蒿等),同時具有鏈m素抗性。本公
司生產的 MSU440 電轉化感受態細胞經特殊工藝制作,pCAMBIA2301 質粒(卡那n素抗性)檢 測,
轉化效率>10cfu/μg DNA
產品組成
組分
MSU440
電轉感受態細胞
10 ×50 μL
100 ×50 μL
定制
基因型:Agrobacterium rhizogenes(Str) MSU440 Ri (agropine type)
存儲條件
-80 ℃保存請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除農桿堿型 Ri 質粒外,無外源質粒 DNA 殘留;
電轉法轉化效率≥10cfu/μg DNA
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷;或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出,在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上,使乙醇充分揮發,然后插入冰中預冷;
2. -80℃保存的農桿菌感受態插入冰中待其融化,加入 0.01-1 μg 質粒 DNA(體積不大于 5 μl),用
200 μl 槍頭將感受態-質粒混合物快速轉移到預冷的電擊杯中,蓋上杯蓋;
3. 開啟電轉儀,設置參數(2500 V 200 Ω25 μF),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成后快速插
入冰中,加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態細胞轉移到無菌空管中,28 ℃振蕩培養 2~3 小時。
(注:此電轉化參數為 Bio-rad 推薦,使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作)
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻,并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上,倒置放于 28℃培養箱培養 2~3 天。
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的 1/10
2. 電轉感受態細胞中不可混入氣泡,轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量;
3. 平板上陽性克隆密度不宜過大,為了獲得大的菌落,應減少質粒用量或最終用于涂板的菌量;
4. MSU440 具有鏈m素抗性,不可用于具有鏈m素抗性質粒的轉化。


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