化工儀器網
詳細介紹
產品簡介
EHA105菌株由 EHA101 菌株改造而來，為 C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利f平抗性基因 Rif，
為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型 Ti 質粒 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，
此質粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒
自身的 T-DNA 轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移)。EHA105 菌株適用于水
稻、煙草等植物的轉基因操作。本公司開發的 EHA105 電轉感受態特別適用于大質粒的轉化：經
pCAMBIA2301 質粒 (size:11633 bp)檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
EHA105
電轉感受態細胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除琥珀堿型 Ti 質粒 pEHA105 外，無外源質粒 DNA 殘留；
電轉法轉化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發，然后插入冰中預冷；
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質粒 DNA（體積不大于 5μl），用
200μl 槍頭將感受態-質粒混合物快速轉移到預冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；
3. 開啟電轉儀，設置參數（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成后快速插
入冰中，加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態細胞轉移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養 2~3 小時。
（注：此電轉化參數為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于 28℃培養箱培養 2~3 天（當平板只含有 50μg/ml Kan 時，28 ℃培養 48 h 即可；平板中同
時加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時，需 28 ℃培養 60 h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時，則需要
28 ℃培養 72~90 h）。
注意事項
1. 感受態細胞解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 利f平濃度不應高于 25μg/μl，利f平濃度過高不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關抗性基因可以不用添加。
化工儀器網