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詳細介紹
產品簡介
P19 蛋白來源于番茄叢矮病毒，可抑制宿主對外源基因的 RNA 沉默效應，提高異源基因轉錄本的穩定性，
進而促進異源蛋白的表達，廣泛應用于轉基因植物及煙草葉片，擬南芥葉片，番茄葉片或原生質體的瞬時
表達系統中。GV3101 菌株為 C58 型背景，核基因中含有篩選標簽——利f平抗性基因 Rif，為了便于轉
化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型 Ti 質粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質粒含有 vir 基因
且可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 質粒含有篩選標簽： Gent ，
賦予 GV3101 菌株慶大m素抗性；在 GV3101 菌株中轉入 help 質粒： pSoup-p19 即為 GV3101(pSoup-p19)
菌株，可幫助 pGreen，62SK，pGs2 等質粒在農桿菌中復制，同時賦予該菌株四環素（Tet）抗性。適用
于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。本公司開發的 GV3101 (pSoup-p19)電轉感受態特別適
用于大質粒的轉化：經
pGs2(卡那m素抗性)質粒檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
GV3101（pSoup-p19）
10 ×50μL
100 ×50μL
定制
電轉感受態細胞
基因型：
C58 (RifR ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pSoup-p19-TetR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除胭脂堿型 Ti 質粒 pMP90 和 pSoup-p19 質粒外，無外源質粒 DNA 殘留；
電轉法轉化效率
≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發，然后插入冰中預冷；
2.
取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質粒 DNA（體積不大于 5μl），用
200μl
槍頭將感受態-質粒混合物快速轉移到預冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；
3. 開啟電轉儀，設置參數（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成后快速插
入冰中，加入
900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態細胞轉移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養 2~3 小時。
（
注：此電轉化參數為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板上，
倒置放于 28℃培養箱培養 2~3 天（當平板只含有 50μg/ml Kan 時，28℃培養 48 h 即可；平板中同時加入
50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時，需 28 ℃培養 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時，則需要 28 ℃
培養
72~90 h）。
注意事項
1.
感受態細胞解凍后應立即使用；
2.
加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3.
利f平濃度不應高于 25μg/μl，利f平濃度過高不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率；
4.
由于 Ti 質粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關抗性基因可以不用添
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