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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
大腸桿菌 Lemo21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞為 T7 可控表達(dá)菌株，專(zhuān)為表達(dá)具有挑戰(zhàn)性的重組蛋白而設(shè)計(jì)。
它作為 BL21(DE3)的衍生菌株，不僅繼承了其特點(diǎn)，還能夠通過(guò)改變 T7 溶菌m（lysY）的水平以
控制表達(dá)水平，T7 溶菌m為 T7 RNA 聚合酶的天然抑制劑。對(duì)蛋白表達(dá)的精準(zhǔn)控制使得
Lemo21(DE3)成為表達(dá)膜蛋白、毒性蛋白、分泌蛋白以及存在可溶性問(wèn)題蛋白的理想選擇。
Lemo21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Lemo21(DE3)
感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ?hsdS/ pLemo(CamR)
λ DE3 = λ sBamHIo ?EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ?nin5
pLemo = pACYC184-PrhaBAD-lysY
產(chǎn)品特性
-BL21(DE3)的增強(qiáng)型菌株；
- 精準(zhǔn)的表達(dá)調(diào)控；
- 在 T7 菌株中表達(dá)范圍最寬；
- 消除了形成包涵體的潛在可能。
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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