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詳細介紹
產(chǎn)品簡介
ArcticExpress (DE3) pRARE2 來源于 ArcticExpress (DE3)，將具有氯m素抗性的 pRARE2 質(zhì)粒導入
ArcticExpress (DE3)細胞中即是 ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株染
色體 DNA 中整合了 λ 噬菌體 DE3 區(qū)，使得 ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株可同時表達 T7 RNA
聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合m，廣泛用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達。
ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株具有四環(huán)s，慶大m素，氯m素抗性；endA1 突變有利于質(zhì)粒
DNA 的穩(wěn)定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使 ArcticExpress (DE3) pRARE2 可以表達適應低溫的伴侶
蛋白 Cpn10 和 Cpn60（來自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。Cpn10 和 Cpn60 伴侶蛋白在 4-12 ℃表現(xiàn)
出較高活性，在 ArcticExpress(DE3) pRARE2 細胞中表達時，可降低重組蛋白包涵體的形成，增加
可溶重組蛋白的表達量及生物活性，比傳統(tǒng)的原核表達伴侶蛋白 GroEL、GroES 等具有更加優(yōu)異的
促融能力。同時，pRARE2 質(zhì)粒可補充大腸桿菌缺乏的 7 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA,
CCC, GGA 和 CGG)對應的 tRNA，提高外源基因的表達水平。吐露港生產(chǎn)的 ArcticExpress (DE3)
pRARE2 感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達 108cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
ArcticExpress(DE3)pRARE2
感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：E. coli B F– ompT hsdS (rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2
(CamR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pRARE2 外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預熱），然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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