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詳細介紹
產品簡介
10/P3 大腸桿菌菌株含有 60-kb 低拷貝數的 P3 質粒，該質粒攜帶卡那m素、四環s和an芐抗性
基因。四環s和an芐抗性基因攜帶琥珀突變，這使得這些基因在細菌的正常生長和復制過程中不
活動。在轉化攜帶抑制因子基因(例如 pcDNA1.1 或 pCDM8)的質粒后，四環s和an芐抗性基因中的
琥珀突變被抑制，從而使宿主大腸桿菌對這些抗生素具有抗性。經 pUC18 質粒轉化檢測，
10/P3 感受態細胞的轉化效率可達 108 cfu/μg DNA 以上。
產品組成
組分
10/P3
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1
nupG
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基（室溫或 37 ℃預熱），后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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