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HaloTag親和試劑-融合蛋白

HaloTag親和試劑-融合蛋白

HaloTag®*是來自紅球紅球菌的細菌鹵代烷脫鹵酶的改良變體  。它被設計成與基于反應性氯烷的配體形成共價鍵。當與目標蛋白質靶標融合時，該專門的反應位點可進行多種生物化學和細胞實驗，例如亞細胞定位，酶促測定等。

生化分析的一個重要方面是直接從表達該構建體的細胞中獲得HaloTag蛋白。Halo-Trap是一種高質量的HaloTag結合蛋白，與瓊脂糖珠偶聯，用于HaloTag融合蛋白及其相互作用伙伴的超高親和力純化。使用Halo-Trap，即使共價結合到HaloTag配體（例如熒光染料）上，也可以免疫沉淀HaloTag-fusion蛋白。HaloTag融合蛋白甚至無需蛋白酶即可洗脫！這種多功能的親和試劑與免疫沉淀，Co-IP，質譜和酶活性測量兼容。

Halo-Trap可以進行細胞成像和生物化學純化。
輸入（I），未結合（FT）和結合（B）的級分通過SDS-PAGE分離，然后進行考馬斯亮藍染色，蛋白質印跡和熒光掃描。由于Halo-Trap在其催化中心外的表位上與HaloTag結合，因此以類似的效率捕獲了未結合的HaloTag融合蛋白（左）和與諸如HaloTag TMR之類的配體共價結合的HaloTag融合物。這種從細胞中進行的超高效，一步純化，使成像和純化成為可能。現在，也可以純化用HaloTag配體處理的細胞進行成像，以進行生化研究-使HaloTag系統像GFP-Trap系統一樣具有廣泛的表達能力。