久久国产精品午夜一区_91精品國產高清久久久久久91_?级毛片免费全部播放_欧美色图在线视频一区二区三区_国产综合亚洲一区二区三区_中文字幕熟女网_国产精品男人爽免费视频_九九无码网战_亚洲日本三级电影在线观看_欧美日韩DVD手机在线不卡

　　293細胞是轉染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系，293T細胞由293細胞派生，同時表達SV40大T抗原，含有SV40復制起始點與啟動子區的質粒可以復制。用Ca3(PO4）2轉染效率可高達50%。蛋白表達水平高，轉染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達的蛋白。瞬時轉染293T細胞是過表達蛋白并獲得細胞內及細胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。

　　通常轉染效率與代數相關，建議選擇代數低的細胞進行轉染。如果質粒中含SV40復制起始點，可以選擇293T或293T/17。這些細胞貼壁不牢，特別是溫度低于30攝氏度時很容易卷曲脫落，建議使用Cellbind細胞培養瓶培養。

　　293細胞培養特性：

　　1、293細胞明顯適應酸性環境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長,換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養基。

　　2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細胞，培養瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復吹打至細胞全成單個懸浮細胞即可。12小時-24小時90%以上細胞貼壁。293細胞傳代時機為達80-90%匯合，傳代比例為1：3。

　　3、293細胞在低代時容易貼壁，生長良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團，且貼壁不牢，用PBS沖洗時即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細胞懸液，購入時先大量凍存。

　　4、復蘇：293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍后復蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養瓶待細胞長滿瓶底的70%～80%時消化凍存,復蘇時將其全部接種至2個50ml瓶中時較為合適。剛復蘇的293貼壁很慢，復蘇接種后24小時內,應盡量減少觀察細胞次數或不作觀察,以免因晃動而影響細胞貼壁。復蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進行更換培養基比較合適,如果用一次性塑料培養瓶可增加細胞貼壁牢度。換液前宜將培養基預熱。