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P3144-pLKO.1-EGFP-Puro基因沉默質粒
  • P3144-pLKO.1-EGFP-Puro基因沉默質粒
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更新時間:2025-05-08 21:00:08

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pLKO.1-EGFP-Puro基因沉默質粒
啟動子U6
復制子pUC
原核抗性Amp
真核抗性Puro
克隆菌株Stbl3
培養條件37℃
表達宿主哺乳細胞
質粒宿主哺乳細胞,慢病毒
質粒用途基因沉默
片段類型shRNA
原核抗性氨芐青霉素
真核抗性嘌呤霉素

注意事項:轉化前請準確查找該質粒相應的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態名稱和培養溫度。
1、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0  1*TE緩沖液來溶解質粒,室溫放置1min;

2、從-80冰箱中取出相應的感受態,置于冰盒上解凍,并做好標記;

3、取2μl質粒加至100μl感受態中,冰浴30min

4、42熱激90s,再冰浴2min

5、加入900μl無抗的LB液體培養基,180rpm震蕩培養45min;

6、6000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀;

7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;

8、將平板正向培養1h,再倒置培養12h~16h;

9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養基中,震蕩培養12h~16h,根據實驗需要提取質粒

 

pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro蛋白表達質粒
pLKO.1-EGFP-Puro基因沉默質粒
pLVX-TetOne-Puro蛋白表達,誘導質粒
pLVML-3×FLAG-MCS-Puro蛋白表達質粒
pCDH-CMV-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro蛋白表達質粒
pDC316-ZsGreen1-shRNA基因沉默質粒
041 pLVPTH2-tTR-KRAB-Cerulean基因沉默質粒
pSIH1-H1-copGFP-T2A-Puro基因沉默質粒
pLVshRNA-EGFP(2A)Puro基因沉默質粒
pLVX-shRNA2基因沉默質粒

 

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