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P5003-pPIC9K蛋白表達質粒
  • P5003-pPIC9K蛋白表達質粒
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更新時間:2025-05-08 21:00:08

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pPIC9K蛋白表達質粒
啟動子AOX1
復制子pBR322
質粒分類酵母系列,畢赤酵母表達載體
質粒大小9276bp
原核抗性Amp/Kan
真核抗性HIS4/G418
克隆菌株DH5α
培養條件37℃
表達宿主酵母細胞
5'測序引物5´AOX:GACTGGTTCCAATTGACAAGC
3'測序引物3´AOX:GGCAAATGGCATTCTGACAT

注意事項:轉化前請準確查找該質粒相應的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態名稱和培養溫度。
1、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0  1*TE緩沖液來溶解質粒,室溫放置1min

2、從-80冰箱中取出相應的感受態,置于冰盒上解凍,并做好標記;

3、取2μl質粒加至100μl感受態中,冰浴30min

442熱激90s,再冰浴2min

5、加入900μl無抗的LB液體培養基,180rpm震蕩培養45min

66000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀;

7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;

8、將平板正向培養1h,再倒置培養12h~16h

9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養基中,震蕩培養12h~16h,根據實驗需要提取質粒

 

pGAPZB蛋白表達質粒
pGAPZC蛋白表達質粒
pRS403蛋白表達質粒
pDONR221/Kan基因模板質粒
pDONR221/Zeo基因模板質粒
pLenti-TagRFP-USP22-sgRNA1基因編輯質粒
pLenti-TagRFP-USP22-sgRNA2基因編輯質粒
pLenti-TagRFP-USP22-sgRNA3基因編輯質粒

 

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