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P25448-pCDH-U6-shRNA-EF1-Puro基因沉默質粒
  • P25448-pCDH-U6-shRNA-EF1-Puro基因沉默質粒
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更新時間:2025-05-08 21:00:08

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pCDH-U6-shRNA-EF1-Puro基因沉默質粒
啟動子U6
復制子pUC
克隆菌株Stbl3
培養條件37度
載體宿主哺乳細胞,慢病毒
基因種屬空載體
基因類型shRNA
原核抗性Amp
真核抗性Puro

注意事項:轉化前請準確查找該質粒相應的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態名稱和培養溫度。
1、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0  1*TE緩沖液來溶解質粒,室溫放置1min

2、從-80冰箱中取出相應的感受態,置于冰盒上解凍,并做好標記;

3、取2μl質粒加至100μl感受態中,冰浴30min

442熱激90s,再冰浴2min

5、加入900μl無抗的LB液體培養基,180rpm震蕩培養45min

66000rpm離心5min,僅留100ul上清混勻菌體沉淀;

7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;

8、將平板正向培養1h,再倒置培養12h~16h

9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養基中,震蕩培養12h~16h,根據實驗需要提取質粒

 

pET20b-T7-MCS-2×Linker-mCherry-6×His蛋白表達質粒
pLVX-EF1α-IRES-Neo蛋白表達質粒
pCDH-CAG-MCS-EF1-Puro蛋白表達質粒
pLKO.1-U6-VPS72(human)-shRNA3-hPGK-EGFP基因沉默質粒
pCDH-U6-shRNA-EF1-Puro基因沉默質粒
pLVX-U6-Golph3(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒
pLKO.1-U6-GPX4(human)-shRNA2-CMV-EGFP-hPGK-Puro基因沉默質粒
pLVX-U6-Golph3(mouse)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒
pLKO.1-U6-GPX4(human)-shRNA1-CMV-EGFP-hPGK-Puro基因沉默質粒
pLVX-U6-HSF1(human)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質粒

 

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