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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常人肺微血管內皮細胞培養

時間:2021-9-27 閱讀:337
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PriCells: 正常人肺微血管內皮細胞培養 實驗材料:

1. 手術切除的正常肺組織

2. 胰蛋白酶/EDTA液:0.05%胰蛋白酶,0.5mmol/L EDTA

3. 6孔培養板:用多聚賴氨酸包被

4. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS(pH=7.4),添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素,pH7.4

5. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷

6. 離心管(15ml、50ml)  


實驗方法:

1. 將肺組織至于無菌的培養皿中用含雙抗的1×PBS(pH=7.4)清洗若干次至無明顯血細胞;

2. 剪取肺組織邊緣微血管豐富的組織,用含雙抗的1×PBS(pH=7.4)清洗兩次;

3. 將剪取的肺邊緣組織剪成2-3mm3大小,加入含雙抗的1×PBS(pH=7.4)清洗;

4. 用進行過滅菌處理的玻璃滴管將剪碎的組織塊和清洗用的1×PBS(pH=7.4)一起轉入15ml離心管中;

5. 250rpm/min離心2 min,小心傾去液體,再加入適量的含雙抗的1×PBS(pH=7.4),用玻璃滴管吹吸液體以清洗組織塊;

6. 繼續250rpm/min離心2 min,小心傾去液體,重復上述步驟若干次,直至離心后的液體中觀察不到明顯的紅色;

7. 將清洗好的組織塊重新轉至無菌的培養皿中,用無菌的200 ml的吸頭將組織塊貼于25cm2培養瓶中;

8. 加入2ml培養基,將培養瓶倒置放于37℃、5%CO2的培養箱中2-3h之后正置培養瓶繼續培養;

9. 培養若干天后,可觀察到組織塊周圍陸續有細胞爬出,繼續培養幾天,直至組織塊周圍的細胞達到較高密度(培養其間兩天換液一次,換液操作時動作一定要輕柔,以防組織塊被搖下);

10. 當組織塊附近的細胞生長到較高密度后,將貼壁的組織塊吹下,換新的培養基繼續培養24;

11. 24h后,用0.25%的Trypsin-EDTA消化細胞,FBS中止消化,將消化后的細胞懸液轉入15ml離心管,1000rpm/min離心5min,之后傾去廢液,用培養基重懸細胞,轉入原來的培養瓶中,繼續在37℃、5%CO2的培養箱中培養。  


PriCells提供:

1. 各種原代細胞特制基礎培養基;

2. 各種原代細胞培養特制添加劑;

3. 原代細胞分離試劑盒;

4. 原代細胞鑒定試劑盒;

5. 各種原代細胞DNA;

6. 各種原代細胞RNA;

7. 各種原代細胞蛋白質;

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