在微生物采樣過程中，交叉污染可能源于設備殘留、人員操作、環境微生物或樣本間相互污染，需從全流程實施嚴格的防污染措施。以下是分場景的標準化操作指南及技術要點：
一、采樣前的設備與耗材滅菌
1.硬件滅菌規范
可重復使用設備：
金屬采樣頭（如撞擊式采樣器）：121℃高壓蒸汽滅菌20分鐘（GB/T38512-2020），或使用70%乙醇+火焰灼燒（適用于現場應急處理）。
塑料部件（如采樣泵管路）：用0.1%過氧乙酸浸泡30分鐘，再用無菌水沖洗3次，晾干后紫外照射（254nm，≥30分鐘）。
一次性耗材：
培養皿、采樣袋等需選用輻照滅菌產品（鈷-60照射，劑量≥25kGy），拆封前檢查包裝完整性（ISO11607-1標準）。
2.滅菌效果驗證
每次滅菌后進行生物監測：放入嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953孢子條，滅菌后培養（56℃，48小時），菌落數應為0（GB8599-2021）。
二、采樣現場的操作防污染體系
1.人員無菌操作準則
三級防護要求：
普通環境：穿戴一次性實驗服+醫用手套（如丁腈手套），采樣前用75%乙醇擦拭手套表面。
高風險環境（如臨床樣本）：需穿戴無菌隔離衣+護目鏡+雙層手套，每采樣1次更換外層手套。
動作規范：
采樣時手臂避免越過采樣口上方，保持采樣頭距身體≥30cm，呼吸方向與采樣口呈90°夾角。
禁止在采樣區域內整理頭發、觸摸面部，如需調整設備，需先更換手套或消毒手部。
2.空間分區與氣流控制
采樣區劃分：
設置50cm×50cm的無菌操作區，用75%乙醇噴灑桌面形成消毒帶，采樣器放置于區域中央。
高潔凈度場景（如ISO5級潔凈室）需在層流工作臺（風速0.36-0.54m/s）或生物安全柜（BSC-II級）內操作。
氣流干擾控制：
采樣前關閉門窗，停止空調系統運行10分鐘（避免氣流攜帶外源微生物），人員走動控制在1米外。
三、樣本采集過程的隔離措施
1.分批次采樣防交叉方案
批次間隔消毒：
每完成1個樣本采樣后，用75%乙醇擦拭采樣器外殼、采樣口及操作臺面，作用5分鐘后再進行下一樣本采集。
若采集不同類型樣本（如環境樣本與臨床樣本），需更換全套采樣頭及管路，避免殘留微生物混淆。
2.特殊樣本的隔離技術
高濃度樣本處理：
處理污水、糞便等高負荷樣本時，使用帶負壓過濾的采樣器（如MilliporeEZ-Pak），采樣后立即密封濾芯，防止氣溶膠擴散。
致病菌采樣：
采用生物安全型采樣頭（如帶HEPA過濾的閉合式采樣器），采樣后放入防漏金屬罐（內層鋪吸水紙+0.5%次氯酸鈉溶液）。
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