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測定蛋白質(zhì)的構(gòu)型和功能要用什么儀器,有哪些步驟!

閱讀:1312        發(fā)布時(shí)間:2022-12-2
   構(gòu)型這個(gè)概念是指一個(gè)有機(jī)分子中各個(gè)原子*的固定的空間排列。這種排列不經(jīng)過共價(jià)鍵的斷裂和重新形成是不會(huì)改變的。構(gòu)型的改變往往使分子的光學(xué)活性發(fā)生變化。蛋白質(zhì)的構(gòu)型就是一級(jí)結(jié)構(gòu),指其氨基酸排列順序。
  測定蛋白質(zhì)的構(gòu)型的主要有兩種方法:Edman降解(Edman degradation)和質(zhì)譜法。
  EDMAN降解法測序是經(jīng)典的方法,通過從多肽鏈游離的N末端(或者C末端,但是很少)測定氨基酸殘基的序列的過程。N末端氨基酸殘基被苯異硫氰酸酯修飾,然后從多肽鏈上切下修飾的殘基,現(xiàn)在一般都是自動(dòng)測序儀。
  質(zhì)譜法測蛋白只要是利用生物質(zhì)譜儀,比如ESI-Q-TOF,ESI-IT-Obitraq。利用特異的酶將蛋白切成肽段,然后通過質(zhì)譜方法進(jìn)行測定,產(chǎn)生數(shù)據(jù)或通過重頭比對,或者通過生物信息學(xué)中數(shù)據(jù)庫搜索的方法推斷出肽段序列,然后再由肽段序列拼接處蛋白序列。這種方法是近些年來隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展而廣泛被使用,但是對于蛋白完整序列測定需要較強(qiáng)的生物信息學(xué)技術(shù)。
  整體而言,EDMAN降解法準(zhǔn)確,但是耗時(shí)長,而且對于所測定的肽段要求很高,不能太長,不能太難修飾等等,一般能測個(gè)20-50堿基不錯(cuò)了。而質(zhì)譜法方法快速,但是準(zhǔn)確性比EDMAN降解法略差。
  另外,樓主講的蛋白功能測定,不同的蛋白質(zhì)功能各異,蛋白功能主要通過生物學(xué)實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證次得到,這個(gè)比較復(fù)雜,沒有固定的模式,要逐一研究。
  另外,像核磁儀可以用來研究蛋白的構(gòu)象或者說晶體結(jié)構(gòu),表面等離子共振儀器可以用來研究蛋白蛋白相互作用,等等,蛋白質(zhì)是未來有限的生物研究資源,現(xiàn)在對蛋白質(zhì)的研究熱情都很高。也有許多相關(guān)的基礎(chǔ)科教書,樓主感興趣可以去看看。

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