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磁珠提取實時熒光定量PCR的引物設計和普通PCR的引物設計有什么區別?

閱讀:809      發布時間:2022-5-27
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  磁珠提取實時熒光定量PCR技術是指在PCR反應體系中加入熒光染料或熒光集團,利用熒光信號來實時監測整個PCR進程,然后通過標準曲線對未知模板濃度進行定量分析。
 
  磁珠提取實時熒光定量PCR在PCR擴增反應體系中加入熒光基團,通過對擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測。
 
  傳統的PCR進行檢測時,擴增反應后需要進行染色處理及電泳分離,并且只能作定性分析,不能準確定量,易造成污染出現假陽性,使其應用受到限制。實時定量PCR技術不僅實現了對模板的定量,且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和*的特點,使得熒光定量PCR逐漸取代常規PCR。
 
  應用實時熒光定量PCR方法同時輔助病原分離、序列測定等手段,能夠及時、準確的對疾病作出診斷。實驗室對檢測的方法的更新與改進持續進行,例如多重熒光定量PCR檢測方法建立等,以期更好的為養殖場服務。
 
  引物設計:在PCR反應體系中加入熒光基團,通過熒光信號不斷累積而實現實時監測PCR全程,然后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量PCR中,對全程PCR擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。實時熒光定量PCR儀應安放在濕度較低、灰塵較少、遠離水池的平穩臺面上,不能有強光直射,室內應通風良好,無腐蝕性氣體。
 
  而普通pcr引物設計:為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。引物應用核酸系列保守區內設計并具有特異性。產物不能形成二級結構。引物長度在15~30堿基之間。

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