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實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人熱休克蛋白70（HSP-70）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人熱休克蛋白70（HSP-70）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。