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酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）為免疫學中的經(jīng)典實驗，本詞條從定義、基本原理、分類方法、操作要點等方面對其進行了詳細介紹。

中文名

酶聯(lián)免疫吸附劑測定

外文名

enzyme linked immunosorbent assay

簡寫

ELISA或ELASA

類型

概念

酶與抗體交聯(lián)，常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行，標記效果好，特別適用于實驗室的小批量制備。其標記程序為：將5μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中，加入新鮮配制的0.06 mol/L的過碘酸鈉（NaIO4）水溶液0.5ml，混勻置4℃冰箱30分鐘 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室溫放置30分鐘后加入含5(g純化抗體的水溶液1ml，混勻并裝透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸鹽緩沖液于4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時（或過夜）使之結合，然后吸出，加--（NaBH4）溶液（ 5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小時，將上述結合物混合液加入等體積飽和硫酸銨溶液，置4℃冰箱30分鐘后離心，將所得沉淀物溶于少許0.02mol/L、pH7.4PBS中，并對之透析過夜（4℃），次日離心除去不溶物，即得到酶標抗體，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，進行測定后，冷凍干燥或低溫保存。