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樣品RNA的制備

閱讀:482      發布時間:2025-4-9
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黃頭病毒(Yellow Head Virus,YHV)是一種RNA病毒,黃頭病是對蝦的主要病害之一,病毒感染的靶器官為蝦的鰓、觸角腺、造血組織、淋巴器官等。病蝦發病初期攝食量增加,然后突然停止吃食,在2~4天內會出現臨床現象并死亡。許多瀕臨死亡的蝦聚集在池塘角落的水面附近,其頭胸甲因里面的干胰腺發黃而變成黃色,對蝦體色發白,鰓棕色或白色,瀕臨死亡的蝦其外胚層和中胚層發源的器官會出現全身性的壞死,已納入世界衛生組織規定之檢疫傳染病之一,因此快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用。本產品基于PCR原理開發。它具有下列特點:
1.一站式,用于不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2.根據黃頭病毒的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,靈敏度比常規RT-PCR高10-100倍,可以達到至少1000拷貝/反應。
4.使用一管式qRT-PCR技術,RT和PCR兩步在一個試管內完成,不需要中間轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。
樣品RNA的制備:
如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第4號(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)。可以用水作為制備的陰性對照。
用自選方法純化N+2個樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒RNA提取試劑盒兼容。
 

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