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反向色譜流動相的pH值
閱讀：1079 發(fā)布時(shí)間：2015-12-24
在以反相液相分離極性和離子型化合物時(shí)常采用緩沖溶液作為流動相。緩沖溶液應(yīng)具有足夠高的離子強(qiáng)度，這樣可以避免出現(xiàn)不對稱峰和峰分裂。
緩沖液應(yīng)具有以下特征：
1 在pH=2~8之間要有足夠大的緩沖容量；
2與檢測器匹配；
3可以與為了改善分離添加的有機(jī)溶劑混溶；
4 能促進(jìn)平衡速度的提升；
5 可以掩蔽吸附劑表面上的非特異活性位點(diǎn)。
通常不使用乙酸鹽緩沖溶液，因?yàn)樗c帶陽離子的溶質(zhì)會形成非極性配合物；也不用鹵化物，以免腐蝕液相色譜儀。
流動相的pH值對可解離溶質(zhì)的影響很大，直接影響到其帶電狀態(tài)和疏水性，所以在分離肽類和蛋白質(zhì)等大分子時(shí)，經(jīng)常要加入修飾性的離子對試劑。
強(qiáng)酸或強(qiáng)堿等離子化的溶質(zhì)，在反相鍵合相上的保留值很低，常在接近于死時(shí)間流出。根據(jù)離子對色譜的原理將一種與樣品離子電荷相反的離子，加入到流動相中，使其與樣品離子結(jié)合生成弱極性的離子對，即中性締合物，增強(qiáng)樣品的疏水性，使保留值加大，達(dá)到適宜的分離效果。