一、傳代培養(yǎng)
傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)的過程。對(duì)單層培養(yǎng)而言，80%匯合或剛匯合的細(xì)胞是較理想的傳代階段。傳代培養(yǎng)中的細(xì)胞傳代培養(yǎng)（subculture），當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)和細(xì)胞不斷分裂，一則細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長(zhǎng)速度減慢甚至停止；另一方面也會(huì)因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長(zhǎng)或發(fā)生中毒。
二、RAW264.7細(xì)胞傳代步驟
在進(jìn)行RAW264.7細(xì)胞傳代時(shí)，首先需要將舊培養(yǎng)基棄去，并使用PBS洗滌細(xì)胞1-2次，確保細(xì)胞表面干凈。然后向培養(yǎng)瓶中加入2 mL PBS，使其浸潤(rùn)所有細(xì)胞，輕輕吹打細(xì)胞以將其吹下，將細(xì)胞懸液收集至無菌離心管中。使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘，棄去上清液，再加入1-2 mL培養(yǎng)基并充分重懸細(xì)胞。
接下來，將懸液按1:2的比例進(jìn)行傳代至新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，并將其置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。通過這些步驟，可以有效地進(jìn)行RAW264.7細(xì)胞的傳代操作，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和持續(xù)生長(zhǎng)，以維持細(xì)胞系的活力和穩(wěn)定性。傳代是細(xì)胞培養(yǎng)中的重要步驟，有助于確保RAW264.7細(xì)胞在研究中的連續(xù)性和穩(wěn)定性。
三、RAW264.7細(xì)胞凍存具體步驟
1. 首先需要收集細(xì)胞并將其轉(zhuǎn)移至無菌離心管中。使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘，將上清液棄去。
2. 隨后，向細(xì)胞中添加1 ml細(xì)胞凍存液（包含20% FBS的培養(yǎng)基和10% DMSO），輕輕吹打混勻，將1 ml細(xì)胞懸液吸取至凍存管中，并做好詳細(xì)的標(biāo)記。
3. 將凍存管置于梯度降溫凍存盒中，并將其放入-80℃冰箱中過夜，確保冷凍過程緩慢進(jìn)行。
4. 隨后，將已凍存的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存，以確保細(xì)胞的保存和使用。通過這些步驟，可以有效地進(jìn)行RAW264.7巨噬細(xì)胞的凍存，以供日后實(shí)驗(yàn)或應(yīng)急需求使用。
四、推薦使用產(chǎn)品
凍存液推薦：WAKO無血清凍存液
實(shí)驗(yàn)中會(huì)用到的PBS推薦：
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