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端粒酶活性檢測

時間:2025/3/17閱讀:313
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端粒酶簡介

端粒酶是一種RNA依賴性DNA聚合酶和逆轉錄酶,由RNA和蛋白質組成,可維持端粒長度(Greider and Blackburn 1989)。端粒酶以自身RNA為模板,合成端粒DNA,從而使細胞獲得無限增殖。其主要由3部分組成,即人端粒酶RNA(humane telomerase RNA component, hTERC)、端粒酶協同蛋白(humane telomerase associated protein, hTEP1)及端粒酶逆轉錄酶(humane telomerase reverse transcriptase, hTERT),其中hTERT被認為是端粒酶活性表達的關鍵組分,hTERT編碼的 mRNA 水平與端粒酶整體活性一致。因此,可以用hTERT亞基的mRNA水平基因表達量來衡量端粒酶活性。


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端粒酶活性檢測的主要方案

 

1. 直接檢測法(Trap法)基于端粒酶對端粒酶底物DNA的催化延伸作用,可對端粒酶進行特異性識別,進而實現端粒酶活性的檢測。檢測端粒酶活性的方法主要有端粒重復序列擴增法(TRAP)、端粒重復序列延伸法、比色法、熒光法、表面增強拉曼光譜法等。

2.間接檢測法(熒光定量法)主要是通過檢測端粒酶催化亞基hTERT基因的表達量間接反映端粒酶的活性。hTERT基因表達量與端粒酶活性極顯著相關,也同時都是重要的腫瘤標志物。催化亞基hTERT基因表達量檢測。


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Biowing端粒酶檢測

  品試劑盒采用雙色熒光qPCR   (TaqMan探針法) 檢測端粒酶催化亞基TERT 因和 內參基  GAPDH 。通過提取細胞RNA ,利用特異性逆轉錄引物進行逆轉錄反應, cDNA為模板在單管中利用 多重熒光定量PCR進行擴增反應 (雙重探針: FAM Cy5) 。選用293T細胞為陽性對照以及MRC- 5細 胞為陰性對照,判斷樣本中是否有TERT基因表達 。該試劑盒具有以下特點:

3.png

1 . 靈敏:雙色探針,靈敏度高。                 

2 . 穩定:全程閉管操作,無交叉污染。

3 . 可靠:含內參基因,避免假陰性。

4 . 方便:操作簡單,無需電泳步驟。

5.  定量: CT值判斷,可定量檢測。

 

結果展示

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  左: 陽性對照的擴增曲線;右: 陰性對照的的擴增曲線

( 藍色為TERT基因曲線, 色為內參基因曲線)

 


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