單細胞蛋白組如何高通量定量？TMT標記全攻略檢測技術服務詳情介紹

細胞是生命活動的基本單元，然而即使同源細胞在相同環境中也可能呈現出顯著的功能差異。這種細胞間異質性在癌癥、免疫、發育等研究中被認為具有重要生物學意義。單細胞RNA測序近年來發展迅速，TMT標記（Tandem Mass Tag）成為單細胞dànbáizhì組定量中廣泛采用的核心策略，憑借其高通量、多通道定量能力，為單細胞蛋白組分析打開新局面。

一、什么是TMT標記？

TMT是同位素編碼的化學標簽，能夠與肽段上的氨基反應，實現多樣本的混合檢測。每一個TMT標簽由質量報告離子部分組成，在質譜中經過高能碎裂后釋放出不同的報告離子，從而對各樣本來源的肽段進行定量。這種“共混檢測、分離定量"的策略極大提升了質譜的通量與比較能力，尤其適用于樣本量極低、需要并行分析多個單元的研究場景。在單細胞蛋白組中，研究人員通常將多個單細胞樣本與一個高量“載體通道"（carrier channel）共同標記，利用載體中的高信號增強MS1的檢測效率，再通過MS2或MS3的碎裂譜圖讀取各通道的報告離子強度，實現jīngquè定量。

二、單細胞TMT定量的核心流程解析

1、單細胞分離與裂解

單細胞蛋白組分析的dìyī步是從組織或細胞群中分離單個細胞。常見方法包括流式分選（FACS）、微流控芯片、自動化移液系統等。分離后的細胞立即裂解，防止蛋白降解或修飾狀態變化。由于dànbáizhì濃度極低，裂解緩沖液需兼顧高效性與兼容性，盡可能減少蛋白吸附與樣品損失。同時使用低結合耗材、微量試劑、控制裂解反應時間等細節也對數據質量至關重要。

2、蛋白酶解與TMT標記

裂解后的dànbáizhì需在微量體系下完成還原、烷基化和酶解步驟。為提高效率，研究者常采用微量優化版yídànbáiméi，并縮短反應時間以防止非特異降解。酶解完成后，肽段與TMT標簽反應。不同單細胞樣本用不同TMT標簽標記，隨后在等比例條件下混合，加入載體通道，形成zuì終的TMT混合樣品。這個混合過程要求jígāo的準確性，比例失衡可能造成定量誤差，甚至引入系統性偏倚。

3、肽段純化與質譜檢測

標記完成的樣品需進行純化去除多余試劑，常用SP3磁珠或StageTip固相提取方法。由于單細胞肽段量極少，每一步操作都需謹慎控制，避免肽段丟失。質譜分析階段，通常采用高靈敏、高分辨的儀器平臺如Orbitrap系列，通過數據依賴采集（DDA）模式進行肽段識別和報告離子定量。為進一步提升定量精度，常結合SPS-MS3技術，有效降低同位素干擾與共碎裂誤差。

4、數據處理與定量分析

TMT數據的分析流程包括原始譜圖解碼、肽段鑒定、報告離子提取、信號歸一化和統計分析。對于單細胞數據，還需特別處理載體通道干擾、缺失值*與批次效應校正。在結果解讀階段，可進一步結合功能富集分析、聚類算法、差異表達分析等方法，揭示細胞狀態分布、功能通路激活及蛋白調控網絡，從而還原單細胞dànbáizhì層面的生物圖譜。

三、TMT在單細胞蛋白組中的優勢

TMT標記技術為單細胞蛋白組提供了可能的解決方案，其主要優勢包括：

• 可在單次實驗中并行分析10-18個樣本，顯著提高數據通量；

• 混合測量減少批次變異，有利于跨樣本定量比較；

• 搭配gāoduān質譜平臺，可檢測千級別以上的蛋白種類。

TMT標記技術為單細胞dànbáizhì組學的高通量定量提供了堅實的工具基礎。它不僅有效提升了微量樣本的檢測能力，也兼顧了數據一致性與通量需求，為探索細胞異質性、疾病機制與藥物反應提供了jígāo的分辨率。隨著質譜技術的演進與樣品處理流程的標準化，TMT在單細胞蛋白組領域的應用正不斷擴展，其潛力遠不止于科研探索，更有望推動jīngzhǔn醫療、生物標志物開發等臨床轉化路徑。百泰派克生物科技持續關注前沿蛋白組技術發展，致力于打造高質量的單細胞蛋白組分析解決方案，助力科研工作者從微尺度揭示生命的本質。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

單細胞蛋白組如何高通量定量？TMT標記全攻略檢測技術服務詳情介紹