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SDS-PAGE在蛋白質(zhì)分子量測定中：應(yīng)用和優(yōu)勢檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì分子量的測定是生命科學(xué)研究中的基本實(shí)驗(yàn)步驟，對于dànbáizhì結(jié)構(gòu)分析、表達(dá)水平評估和純度檢測具有重要意義。其中，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE） 是zuì常用的方法之一，以其高效、經(jīng)濟(jì)和可重復(fù)性強(qiáng)的特點(diǎn)廣泛應(yīng)用于dànbáizhì研究。本文將介紹 SDS-PAGE 的技術(shù)原理、實(shí)驗(yàn)流程、應(yīng)用場景、優(yōu)勢及局限性，并探討其在dànbáizhì分子量測定中的重要作用。

一、SDS-PAGE 的技術(shù)原理

SDS-PAGE 的核心原理是基于dànbáizhì在聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率來推測其分子量。該方法利用SDS（十二烷基硫酸鈉，Sodium Dodecyl Sulfate） 將dànbáizhì變性，使其僅根據(jù)分子量而非電荷進(jìn)行分離。

1、 SDS 在dànbáizhì分離中的作用

（1）SDS 是一種強(qiáng)陰離子去污劑，能夠與dànbáizhì的疏水區(qū)結(jié)合，使dànbáizhìwánquán變性并形成線性多肽鏈。

（2）由于 SDS 賦予dànbáizhì均一的負(fù)電荷，因此在電場作用下，所有dànbáizhì僅根據(jù)其分子量大小進(jìn)行遷移。

2、 聚丙烯酰胺凝膠的分離機(jī)制

（1）凝膠濃度調(diào)控分離范圍：聚丙烯酰胺凝膠的孔徑大小取決于單體（丙烯酰胺）和交聯(lián)劑（N,N'-亞甲基雙丙烯酰胺）的比例。低濃度凝膠適用于大分子蛋白分離，而高濃度凝膠適用于小分子蛋白分離。

（2）dànbáizhì遷移與分子量關(guān)系：較小的dànbáizhì能更容易穿透凝膠孔隙，因此分子量小的蛋白遷移得更遠(yuǎn)，而分子量大的蛋白移動較慢。

3、 遷移率與分子量的對數(shù)關(guān)系

dànbáizhì在 SDS-PAGE 中的遷移率（Rf 值）與其分子量的對數(shù)呈負(fù)相關(guān)，即：

log(MW)=a?b×Rf

其中 MW 為蛋白分子量，Rf 為遷移率。因此，通過測定標(biāo)準(zhǔn)蛋白的 Rf 值，可以繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而估算未知蛋白的分子量。

二、SDS-PAGEdànbáizhì分子量測定的實(shí)驗(yàn)流程

1、 凝膠制備

（1）分離凝膠（Resolving Gel）：主要用于分離dànbáizhì，濃度通常為 6%-15%，根據(jù)dànbáizhì分子量大小選擇適當(dāng)?shù)臐舛取?/p>

（2）濃縮凝膠（Stacking Gel）：濃度較低（通常為 4%-5%），用于提高分辨率，使dànbáizhì在進(jìn)入分離凝膠前聚集成窄條帶。

2、 樣品處理

dànbáizhì樣品需與SDS 變性緩沖液（含 β-巰基乙醇或 DTT）混合，在 95°C 加熱 5-10 分鐘，使dànbáizhìwánquán變性并形成均勻的負(fù)電荷。

3、 電泳

在緩沖液（Tris-Glycine-SDS）中，以恒壓或恒流進(jìn)行電泳，一般 100-200V 運(yùn)行 1-2 小時(shí)，直到指示染料（如溴酚藍(lán)）到達(dá)凝膠底部。

4、 dànbáizhì染色

（1）考馬斯亮藍(lán)染色（Coomassie Brilliant Blue Staining）：常用染色方法，靈敏度約為 50-100 ng。

（2）銀染（Silver Staining）：高靈敏度，可檢測到 1 ng 級別的dànbáizhì。

（3）熒光染料（如 SYPRO Ruby、CyDye）：適用于定量分析和高靈敏度檢測。

5、 分子量計(jì)算

通過與標(biāo)準(zhǔn)蛋白 Marker 進(jìn)行對比，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線估算未知蛋白的分子量。

三、SDS-PAGE 在dànbáizhì分子量測定中的應(yīng)用

1、 確定dànbáizhì的分子量

（1）通過 SDS-PAGE 可估算未知蛋白的表觀分子量，用于初步鑒定。

（2）在dànbáizhì純化后，利用 SDS-PAGE 可確認(rèn)目標(biāo)蛋白是否為預(yù)期分子量。

2、 評估蛋白純度

用于檢測蛋白純化過程中的雜質(zhì)蛋白條帶，以確保目標(biāo)蛋白的純度符合實(shí)驗(yàn)要求。

3、 監(jiān)測蛋白表達(dá)

在重組蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)中，SDS-PAGE 可用于比較不同誘導(dǎo)條件下蛋白的表達(dá)水平，評估表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)化情況。

4、 檢測蛋白翻譯后修飾

由于翻譯后修飾（如磷酸化、糖基化）會影響蛋白的分子量，SDS-PAGE 可用于觀察蛋白遷移率變化，提示可能的修飾發(fā)生。

四、SDS-PAGEdànbáizhì分子量測定的優(yōu)勢及局限性

1、 SDS-PAGE 的優(yōu)勢

（1）操作簡單，實(shí)驗(yàn)流程易于掌握，設(shè)備成本較低。

（2）適用范圍廣，可檢測大多數(shù)dànbáizhì，適用于生物醫(yī)藥、蛋白組學(xué)等領(lǐng)域。

（3）重復(fù)性好，電泳結(jié)果具有較高的穩(wěn)定性，適合日常實(shí)驗(yàn)室檢測。

（4）分辨率較高，能夠清晰區(qū)分 5-250 kDa 范圍內(nèi)的dànbáizhì。

2、 SDS-PAGE 的局限性

（1）分子量測定的精度有限：SDS-PAGE 只能提供dànbáizhì的“表觀分子量"，受翻譯后修飾和蛋白結(jié)構(gòu)影響。

（2）無法識別蛋白序列：SDS-PAGE 只能分離蛋白，不能提供蛋白氨基酸序列信息，需要結(jié)合質(zhì)譜（MS）或dànbáizhì印跡（Western Blot）進(jìn)行鑒定。

（3）低豐度蛋白檢測靈敏度較低：考馬斯亮藍(lán)染色檢測下限較高，需要使用銀染或熒光染色提高靈敏度。

（4）難以分辨相似分子量蛋白：如果兩種dànbáizhì的分子量非常接近，可能無法實(shí)現(xiàn)清晰區(qū)分，需要更高分辨率的方法（如 2D-PAGE）。

SDS-PAGE 作為dànbáizhì分子量測定的經(jīng)典方法，憑借其操作簡便、成本低、重復(fù)性好的優(yōu)勢，在生物研究和藥物開發(fā)中仍然占據(jù)重要地位。盡管其在高精度分子量測定和翻譯后修飾分析方面存在一定局限，但與Western Blot、LC-MS 等方法結(jié)合使用，可以更全面地解析dànbáizhì的分子特性。憑借zhuānyè的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和7大質(zhì)量控制檢測平臺，百泰派克生物科技為從事dànbáizhì組學(xué)研究的科研人員提供高質(zhì)量基于SDS-PAGE的dànbáizhì分子量測定服務(wù)，獲得廣泛認(rèn)可。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

SDS-PAGE在蛋白質(zhì)分子量測定中：應(yīng)用和優(yōu)勢檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹