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dànbáizhì組學定量技術的發展極大推動了生命科學研究的進步,尤其是在疾病機制探索、生物標志物發現和藥物開發領域。作為兩種主流的標記型定量方法,iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)長期以來被廣泛應用于復雜樣本的定量分析。兩者在原理、性能和應用場景上各有特點,如何選擇合適的方法,成為科研人員在實驗設計初期的重要決策之一。
一、iTRAQ與TMT的基本原理
iTRAQ和TMT技術均采用同位素標記策略,通過在肽段上引入等重標簽,使不同樣本在一級質譜(MS1)中表現為相同質量,但在二級質譜(MS2)中釋放特定的報告離子,實現多樣本的相對定量。二者都極大提高了多樣本同時分析的效率,且能夠兼容復雜生物樣本,如組織、細胞和體液。iTRAQ試劑zuì初提供4-plex(四重標記)版本,后擴展至8-plex;TMT則從6-plex起步,逐步發展到11-plex、16-plex甚至18-plex,極大提升了樣本通量。隨著質譜儀性能的提升,特別是高分辨率Orbitrap質譜的發展,TMT的高通量優勢逐漸得到更多發揮。
二、靈敏度與定量準確性
在靈敏度和定量準確性方面,iTRAQ和TMT表現接近,但也存在細微差異。iTRAQ因較早推廣,在早期的質譜平臺上積累了豐富的數據和經驗,尤其適用于蛋白表達量變化較大的樣本。而TMT隨著質譜分辨率的提升,表現出在低豐度蛋白檢測方面的潛力,特別是在多重標記體系(如TMTpro 16plex)中,能更好地兼顧深度和定量線性。iTRAQ和TMT均存在“比率壓縮"(ratio compression)現象,即共碎片干擾導致定量精度下降。這一問題在高復雜度樣本中尤為明顯,但通過結合高分辨率MS2或MS3策略、優化樣品預處理流程,可以有效緩解。
三、多重標記能力與實驗設計靈活性
樣本通量是選擇定量方法時的重要考量因素。TMT憑借其更高的多重標記能力,為大規模比較實驗提供了更大靈活性。例如,TMT 16plex允許一次性對16個樣本進行并行分析,極大節省了實驗時間和儀器資源,適合臨床大隊列、時間序列研究等高樣本量項目。iTRAQ雖然在多重標記數量上稍顯遜色,但對于中小規模研究仍然足夠。特別是在對比組數較少、對數據一致性要求較高的實驗中,iTRAQ依然是一種穩健的選擇。
四、數據質量與分析兼容性
兩種技術都要求較高水平的前端樣品制備標準化,包括蛋白提取、酶解、標記反應和分離純化過程。質控環節對于確保數據質量至關重要。在數據分析層面,主流質譜數據處理軟件(如Proteome Discoverer、MaxQuant、SpectroMine等)均支持iTRAQ和TMT數據處理。TMT近年來在算法優化和數據庫匹配方面有較多更新,尤其是對MS3數據的專門支持,進一步提升了定量準確性。此外,TMT因具有更細致的標簽設計(例如在TMTpro系列中采用更優化的報告離子排布),在復雜樣本分辨率上表現更優,有助于提高蛋白鑒定深度。
五、成本與實驗可及性
成本因素在實驗方案選擇中不可忽視。iTRAQ和TMT的試劑價格相近,均高于無標記(Label-free)定量方法。但考慮到樣本通量、數據質量和結果一致性,標記型定量在許多應用場景下仍然具有較高性價比。實際應用中,iTRAQ因其試劑盒在市場上存在時間較長,某些情況下可能更易于采購和管理。而TMT,尤其是高通量版本,如TMTpro 16plex和18plex,雖然單次實驗成本更高,但在單位樣本成本攤銷后,整體投入可能更具優勢,尤其適合大規模項目。
六、應用場景比較
根據項目需求的不同,iTRAQ和TMT各有適配優勢:
生物標志物篩選與驗證:TMT因高通量特性,適合處理大規模臨床樣本
基礎機制研究:iTRAQ和TMT均可勝任,依據樣本量和實驗預算靈活選擇
時間序列研究:TMT在多時間點、多條件實驗設計中優勢明顯
細胞或小動物模型研究:iTRAQ在控制批次效應和提高數據一致性方面具有良好表現
iTRAQ與TMT技術各有千秋,選擇何種dànbáizhì定量方法,應基于實驗規模、預算、樣本特性以及研究目標綜合考量。作為生命科學領域可信賴的合作伙伴,百泰派克生物科技始終致力于為客戶提供zhuānyè、高質量的定量蛋白組分析服務,助力科學探索與產業創新。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
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4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
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