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特異性糖苷水解酶ENDO-CC內(nèi)切酶

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更新時(shí)間：2025-07-24 16:18:03瀏覽次數(shù)：3066次

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應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合 主要用途 標(biāo)準(zhǔn)品,糖苷合成，抗體修飾、ADC藥物制作
內(nèi)切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 (ENGase) 是糖苷水解酶，作用于 N-聚糖的 N,N'-二乙酰殼二糖核心內(nèi)的 β-1,4-糖苷鍵。 已經(jīng)分離出幾種 ENGase。
特異性糖苷水解酶ENDO-CC內(nèi)切酶就是其中一種。

　　特異性糖苷水解酶ENDO-CC內(nèi)切酶， ENGase 廣泛應(yīng)用于需要糖肽、糖蛋白和糖復(fù)合物的均質(zhì)糖苷的合成應(yīng)用中。 治療性單克隆抗體的聚糖重構(gòu)尤其重要，因?yàn)榫厶墙Y(jié)構(gòu)影響抗體效應(yīng)器功能、穩(wěn)定性和藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)。

 
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　　為了控制Fc-N-聚糖，我們進(jìn)行了Fc-N-聚糖從異構(gòu)N-糖基化模式重排為用化學(xué)酶法與兩種類型的內(nèi)-β-乙酰基合成同質(zhì)N-聚糖氨基葡糖苷酶(ENG’ases)，一種作為水解酶切割所有異構(gòu)體的酶N-聚糖，另一種用作糖苷合成酶以產(chǎn)生均勻的N-聚糖。
 
　　作為起始材料，我們使用了轉(zhuǎn)基因家蠶中產(chǎn)生的抗Her2抗體
 
　　繭，由非巖藻糖基少甘露糖型(Man2-3GlcNAc2)、高甘露糖組成
 
　　型(Man4-9GlcNAc2)和復(fù)合型(Man3GlcNAc3-4)N-聚糖。因此
 
　　幾種ENG’ase(endoS、endoM、endoD、endoH和endoLL)的裂解
 
　　抗體上的聚糖通過endoS、endoD和endoLL的組合。接下來，所需的N-聚糖(M3；Man3-
 
　　GlcNAc1、G0；GlcNAc2Man3GlcNAc1、G2；Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc1，A2；NeuAc2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc1)
 
　　從相應(yīng)的惡唑啉轉(zhuǎn)移到具有ENG’ase突變體(endo-S-D233Q)的完整抗Her2抗體上的GlcNAc殘基，并且
 
　　獲得了糖工程化的抗Her2抗體。抗Her2抗體的結(jié)合測(cè)定具有FcγRIIIa-V158的同質(zhì)N-聚糖表明γRIIIa-V158的親和力。此外，糖工程抗Her2的ADCC測(cè)定使用SKBR-3和BT474進(jìn)行抗體(mAb-M3、mAb-G0、mAb-G2和mAb-A2)并揭示了糖型影響ADCC活性。
 
　　特異性糖苷水解酶ENDO-CC內(nèi)切酶
 

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