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基因敲除原理 我們是利用CRISPR/Cas9基因敲除系統，CRISPR是一種來源于細菌免疫系統的基因編輯技術，能精確識別靶細胞DNA片段中靶點的核苷酸序列，利用核酸內切酶蛋白對DNA靶點序列進行切割，產生雙鏈DNA斷裂，斷裂將在體內被細胞修復機制修復，其中，非同源末端連接NHEJ這種修復將產生短的核酸插入或刪除，其帶來的基因移碼突變，將導致提前出現終止密碼子，從而完成對靶細胞DNA目的基因片段的敲除。在PAM片段上游設計sgRNA后，通過構建基因敲除載體，結合慢病毒系統，可以實現外源基因的整合，利用抗生素或熒光，最終篩選出成功實現基因敲除的細胞。 CRISPR/Cas9基因敲除系統服務優勢： （1）廣泛適用于哺乳動物細胞，脫靶率更低 （2）提高轉染率，減低細胞毒性，縮短實驗周期 基因敲除細胞株的項目流程： （1）項目評估（免費） （2）細胞抗生素敏感濃度摸索與單克隆形成驗證 （3）sgRNA設計與敲除載體構建 （4）慢病毒包裝與轉染 （5）陽性多克隆篩選 （6）陽性單克隆篩選 （7）敲除驗證 基因敲除服務周期：根據細胞生長特性與基因不同，服務周期在5～10周不等。 服務流程：                      客戶提供：靶細胞及其培養方案、基因名稱 交付標準：1×基因敲除陽性單克隆細胞株（復蘇）                   1×項目結題報告 服務保證： （1）項目啟動后，密切跟進實驗進展，每兩周進行一次項目進度匯報。 （2）項目結題報告包含sgRNA序列、實驗詳細記錄、測序結果及分析等，滿足客戶后期論證材料需求。 （3）基因敲除陽性單克隆均經過靶標片段T載體克隆測序驗證，保證基因敲除。
運輸方式：常溫運輸/干冰運輸 用途限制：僅供科研
細胞接收后處理： 收到細胞后，及時核對培養瓶/凍存管上標注的細胞名稱是否正確，以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況。如發現問題請及時與銷售聯系。 收到常溫運輸的細胞培養瓶后，請在顯微鏡下仔細觀察細胞生長狀態，并拍照留證（為細胞售后提供依據）。將培養瓶放置于37℃培養箱中靜置培養，待細胞融合度為70%~80%狀態再進行細胞處理。（注：運輸過程易導致部分細胞脫落，漂浮，屬正?，F象，放置培養箱中靜置培養，可使其貼壁；另。請使用新鮮培養基和新的T53培養瓶進行細胞傳代，不要使用原培養瓶中的培養基。 收到凍存細胞應立即復蘇或放置液氮罐中。 收到復蘇好后的細胞一周內，如若發現細胞狀態不佳或細胞污染，請及時與銷售聯系，并提供該細胞詳細的實驗操作說明和每天細胞狀態的圖片記錄（填寫【細胞售后反饋表】），經由我司技術人員核實，若確認細胞本身存在問題，由我司重新復蘇細胞并補發。