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基因敲除原理 我們是利用CRISPR/Cas9基因敲除系統(tǒng)，CRISPR是一種來(lái)源于細(xì)菌免疫系統(tǒng)的基因編輯技術(shù)，能精確識(shí)別靶細(xì)胞DNA片段中靶點(diǎn)的核苷酸序列，利用核酸內(nèi)切酶蛋白對(duì)DNA靶點(diǎn)序列進(jìn)行切割，產(chǎn)生雙鏈DNA斷裂，斷裂將在體內(nèi)被細(xì)胞修復(fù)機(jī)制修復(fù)，其中，非同源末端連接NHEJ這種修復(fù)將產(chǎn)生短的核酸插入或刪除，其帶來(lái)的基因移碼突變，將導(dǎo)致提前出現(xiàn)終止密碼子，從而完成對(duì)靶細(xì)胞DNA目的基因片段的敲除。在PAM片段上游設(shè)計(jì)sgRNA后，通過(guò)構(gòu)建基因敲除載體，結(jié)合慢病毒系統(tǒng)，可以實(shí)現(xiàn)外源基因的整合，利用抗生素或熒光，最終篩選出成功實(shí)現(xiàn)基因敲除的細(xì)胞。 CRISPR/Cas9基因敲除系統(tǒng)服務(wù)優(yōu)勢(shì)： （1）廣泛適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，脫靶率更低 （2）提高轉(zhuǎn)染率，減低細(xì)胞毒性，縮短實(shí)驗(yàn)周期 基因敲除細(xì)胞株的項(xiàng)目流程： （1）項(xiàng)目評(píng)估（免費(fèi)） （2）細(xì)胞抗生素敏感濃度摸索與單克隆形成驗(yàn)證 （3）sgRNA設(shè)計(jì)與敲除載體構(gòu)建 （4）慢病毒包裝與轉(zhuǎn)染 （5）陽(yáng)性多克隆篩選 （6）陽(yáng)性單克隆篩選 （7）敲除驗(yàn)證 基因敲除服務(wù)周期：根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性與基因不同，服務(wù)周期在5～10周不等。 服務(wù)流程：                      客戶提供：靶細(xì)胞及其培養(yǎng)方案、基因名稱 交付標(biāo)準(zhǔn)：1×基因敲除陽(yáng)性單克隆細(xì)胞株（復(fù)蘇）                   1×項(xiàng)目結(jié)題報(bào)告 服務(wù)保證： （1）項(xiàng)目啟動(dòng)后，密切跟進(jìn)實(shí)驗(yàn)進(jìn)展，每?jī)芍苓M(jìn)行一次項(xiàng)目進(jìn)度匯報(bào)。 （2）項(xiàng)目結(jié)題報(bào)告包含sgRNA序列、實(shí)驗(yàn)詳細(xì)記錄、測(cè)序結(jié)果及分析等，滿足客戶后期論證材料需求。 （3）基因敲除陽(yáng)性單克隆均經(jīng)過(guò)靶標(biāo)片段T載體克隆測(cè)序驗(yàn)證，保證基因敲除。
運(yùn)輸方式：常溫運(yùn)輸/干冰運(yùn)輸 用途限制：僅供科研
細(xì)胞接收后處理： 收到細(xì)胞后，及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶/凍存管上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否正確，以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。如發(fā)現(xiàn)問(wèn)題請(qǐng)及時(shí)與銷售聯(lián)系。 收到常溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞培養(yǎng)瓶后，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下仔細(xì)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，并拍照留證（為細(xì)胞售后提供依據(jù)）。將培養(yǎng)瓶放置于37℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度為70%~80%狀態(tài)再進(jìn)行細(xì)胞處理。（注：運(yùn)輸過(guò)程易導(dǎo)致部分細(xì)胞脫落，漂浮，屬正常現(xiàn)象，放置培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，可使其貼壁；另。請(qǐng)使用新鮮培養(yǎng)基和新的T53培養(yǎng)瓶進(jìn)行細(xì)胞傳代，不要使用原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基。 收到凍存細(xì)胞應(yīng)立即復(fù)蘇或放置液氮罐中。 收到復(fù)蘇好后的細(xì)胞一周內(nèi)，如若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不佳或細(xì)胞污染，請(qǐng)及時(shí)與銷售聯(lián)系，并提供該細(xì)胞詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明和每天細(xì)胞狀態(tài)的圖片記錄（填寫(xiě)【細(xì)胞售后反饋表】），經(jīng)由我司技術(shù)人員核實(shí)，若確認(rèn)細(xì)胞本身存在問(wèn)題，由我司重新復(fù)蘇細(xì)胞并補(bǔ)發(fā)。