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脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的配方

閱讀:2074      發(fā)布時間:2023-12-13
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脂質(zhì)體和非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑是常用的基因遞送技術,它們能把DNA、siRNA、mRNA等分子送到真核細胞中,用于各種研究和藥物開發(fā)。今天我們來談談脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的配方。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑主要由脂質(zhì)體、DNA、緩沖液和穩(wěn)定劑組成。脂質(zhì)體是一種包裹DNA的物質(zhì),能把它送進細胞。它的配方包括正電荷脂質(zhì)、中性脂質(zhì)、膽固醇和PEG。緩沖液負責調(diào)整pH值和離子強度,有助于提高轉(zhuǎn)染效率。穩(wěn)定劑則保護所有這些東西,防止在制備過程中降解。

常見的一種脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑配方如下:

* 1,2-二棕櫚酸-3-辛?;?甘油(DOTAP)50μg + 膽固醇10μg + 磷酸二氫鈉2.5μg + 氯化鈉150mM + 無菌水10ml。

制作方法:

1. 把DOTAP和膽固醇溶于氯仿中,制成脂質(zhì)體溶液。

2. 把緩沖液的無菌水和氯化鈉溶液混合。

3. 把脂質(zhì)體溶液和DNA混合,再加入緩沖液中,輕輕攪勻。

4. 靜置15-30分鐘,讓脂質(zhì)體和DNA充分結(jié)合。

5. 將混合物滴入細胞培養(yǎng)皿,進行轉(zhuǎn)染。

不同的細胞系和DNA片段可能需要不同的轉(zhuǎn)染試劑配方和條件。所以在開始實驗前,最好先優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑的配方和條件。

總的來說,了解脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的配方和制備方法對更好地開展研究十分有幫助。

本期內(nèi)容:脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的配方

下期內(nèi)容:脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑與非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的區(qū)別

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