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細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳，該如何調(diào)整？

細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)差的原因及解決方法，復(fù)蘇時可根據(jù)以下情況及時進(jìn)行調(diào)整。

1. 細(xì)胞凍存不當(dāng)

解決方法：可以嘗試調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)，加大血清比例，后面再繼續(xù)傳代調(diào)整。

2. 自行制備的凍存細(xì)胞無活性

解決方法：制備凍存細(xì)胞時使用傳代次數(shù)少且處于對數(shù)期的細(xì)胞；提高凍存密度有助于提升復(fù)蘇存活率，推薦密度為100~300萬細(xì)胞/mL。

3. 細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng)

解決方法：復(fù)蘇講究“快融"，越快融化，細(xì)胞所受損傷就越小。確保冷凍細(xì)胞解凍迅速，接種前用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。

4. 復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng)

解決方法：確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱，并且盡快移除含有冷凍保護(hù)劑的培養(yǎng)基，防止活力下降。

5. 處理細(xì)胞時動作不夠輕柔

解決方法：凍存和復(fù)蘇過程對大多數(shù)細(xì)胞都會造成不利影響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細(xì)胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時除外)，也不要高速離心細(xì)胞。

6. 細(xì)胞稀釋過度

解決方法：將解凍后的細(xì)胞高密度接種，以改善復(fù)蘇效果。

7. 凍存液中所用保護(hù)劑在儲存過程中未避光

解決方法：如果未避光儲存，凍存保護(hù)劑會轉(zhuǎn)變?yōu)閷?xì)胞有毒性的物質(zhì)；建議新取一只凍存保護(hù)劑，重新凍存細(xì)胞。